【摘 要】目的：分析荧光定量PCR法检测食管癌中Livin基因特征，探究其临床意义。方法：选取2018年2月-2019年2月在我院接受治疗的86例食管癌患者作为研究对象，采用荧光定量PCR法分别对患者的癌组织以及癌旁（距离>6cm）的正常组织中的Livin基因进行检测，探究其表达与食管癌之间的关系。结果：采用荧光定量PCR法进行检测后，食管癌患者的癌组织中Livin基因表达水平明显高于正常组织中的Livin基因表达水平，其中P<0.05，差异性显著。结论：通过荧光定量PCR法对食管癌患者的癌组织和正常组织中Livin基因特征进行分析后，可以明确得出Livin基因的表达水平与食管癌的发生具有相关性，为食管癌的预防和检测提供有力的参考依据。
【关键词】荧光定量PCR法;食管癌;Livin基因;相关性
【中图分类号】R691.4 【文献标识码】A 【文章编号】1005-0019（2019）20--02
食管癌属于一种多发性消化道肿瘤，具有极高的死亡率，给患者的生命健康造成严重的威胁。食管癌患者早期症状不明显，因此食管癌被确诊后往往已经为中晚期，延误了最佳治疗时期[1]。因此，探究食管癌癌组织与正常组织中某些基因表达的差异对于食管癌的早期诊断具有重要的意义。我院为了探究Livin基因特征与食管癌的相关性，进行了本次研究，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2018年2月-2019年2月在我院接受治疗的86例食管癌患者作为研究对象，取患者癌组织和正常组织各86例离体制成标本，置于超低温下冷冻保存。86例患者中男性为56例，女性为30例，年龄在38-75岁，平均年龄为（57.21±3.54）岁，病程在1-5年，平均病程為（2.53±1.24）年，其中腺鳞癌患者为12例，食管鳞癌患者为74例。本次研究所选患者均被确诊为食管癌，临床资料完整，手术前均未进行放化疗治疗。本次研究经过伦理委员会的批准，且经过患者和家属的知情且同意。
1.2 方法
1.2.1 材料和设备 该研究选用RNA提取剂和qPCR试剂均为荧光定量PCR检测专用试剂，cDNA 第一链合成试剂盒、引物以及探针均购自中山医科大学达安基因有限公司，实时荧光定量PCR检测仪器（ 型号： Piko-Real 96 Real - Time PCR System） 购自美国赛默飞世尔公司[2]。
1.2.2 样品RNA提取和cDNA的制备 分别取患者癌组织和正常组织样品研磨后加入1mlRNA提取剂，混匀静置5min，按照标准提取方法提取组织中的RNA，提取后采用紫外分光光度计和1%甲醛变性凝胶电泳对其进行定量分析，选取纯度和浓度均合格的RNA备用。采用标准cDNA进行反转录，制备cDNA，取2 μg上述制得的RNA样品为模板，加无RNase 水定容至6 μL，加入1 μL 50 μmol/L Oligo（ dT），5 μL纯水，混匀后，置于65℃条件下反应5 min，迅速冰浴后依次加入缓冲液及其他试剂后混匀，置于42℃ 反应60 min，最后将其70℃反应10min，即得。将制备的cDNA冷冻保存后，备用[3]。
1.2.3 荧光定量PCR检测 采用荧光定量PCR检测法对上述制得的cDNA进行基因定量检测，反应条件为：50℃条件下反应10s，升温至95℃反应10min，之后维持同温度反应15s，之后温度降至60℃反应反应1min，按照这个反应为一次，共反应42次，反应结束后，观察输出的标准曲线，并计算患者癌组织和正常组织中Livin基因的相对含量[4]。
1.3 评价指标 采用荧光定量PCR检测患者癌组织和正常组织中Livin基因的相对表达量，对患者癌组织和正常组织中Livin基因水平进行比较，探究Livin基因特征与食管癌发生的相关性。
1.4 统计学处理 采用SPSS21.0统计软件对本次食管癌患者的研究结果进行统计和分析，运用t检验方法，并采用进行检验，采用重复多次的实验方法计算两组患者的Livin基因水平。当P<0.05时，表示两组数据之间的差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 食管癌患者癌组织和正常组织中Livin基因水平对比情况
采用荧光定量PCR检测患者癌组织和正常组织中Livin基因的相对表达量水平后，得出：食管癌患者的癌组织中Livin基因水平明显高于正常组织中的Livin基因水平，其中t=6.212，P=0.021，差异性显著，详细数据见表1。
3 讨论
Livin基因所表达的蛋白为一种人类凋亡抑制蛋白，该种蛋白具有抗细胞凋亡的特性，能够使得肿瘤细胞获得不死性。大量的研究表明，该种基因的存在与肿瘤的发生和发展均具有一定的关系[5]。
我院为了探究食管癌与Livin基因特征之间的相关性，选取2018年2月-2019年2月在我院接受治疗的86例食管癌患者，采用荧光定量PCR法分别对患者的癌组织以及正常组织中的Livin基因进行检测后得出：食管癌患者的癌组织中Livin基因表达水平明显高于正常组织中的Livin基因表达水平，其中P<0.05，差异性显著。
综上所述，通过荧光定量PCR法对食管癌患者的癌组织和正常组织中Livin基因特征进行分析后，可以明确得出Livin基因的表达水平与食管癌的发生具有相关性，为食管癌的预防和检测提供有力的参考依据。
参考文献
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李娜，李勇，高洪波，郭淑霞，杨鑫磊，王冬慧，巩平.凋亡抑制蛋白Livin在食管癌中的表达及意义[J].山东医药，2011，5148：85-86+120.
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李慎柯，吴新，刘月芬，姜祖光，岳文彬.实时荧光定量PCR法检测食管癌组织中细胞周期蛋白CyclinD1和CyclinA基因的表达[J].医药论坛杂志，2014，3505：56-58.
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