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摘要：为比较研究选择性雌激素受体调节剂OBHS和雷洛昔芬（RAL）抗肿瘤作用效果。采用MTT法检测了不同浓度的OBHS和RAL对非洲绿猴肾细胞系（VERO）、乳腺癌细胞系（MCF-7）、卵巢癌细胞系（SK-O-V3）以及前列腺癌细胞系（DU145）的细胞活性的影响。实验结果表明，OBHS和RAL均可以抑制MCF-7、SK-OV-3及DU145的活性，但是OBHS对正常细胞VERO基本无毒副作用。
关键词：OBHS;雷洛昔芬;抗肿瘤
中图分类号：Q291 文献标识码：A 文章编号：1674-9944（2019）22-0193-03
1 引言
雌激素受体a（ER（x）和雌激素受体β（ERβ）是参与调节人体多种辅助生理学反应的转录因子[1]。有研究表明ERα与乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌以及子宫内膜癌等密切相关[2～4]，因此ERα被认为是癌症治疗中的主要治疗靶标。选择性雌激素受体调节剂（SERMs）是一類可以与雌激素受体（ER）高亲和力结合的化合物，在不同组织中表现出类雌激素作用或抗雌激素的活性，其组织特异性使它在血管、子宫、乳腺和骨骼等组织中发挥着不同的作用[5～7]。
OBHS是人工合成的ERa选择性的拮抗剂，与第二代SERMs雷洛昔芬（RAL）的拮抗作用机制相薣8]小？研究发现OBHS在子宫内膜癌细胞系HEC-1-A和子宫内膜异位模型中均表现出拮抗雌激素转录激活作用[8，9]，但OBHS对其他类型的肿瘤细胞的作用则有待进一步研究。
2 材料与方法
2.1 材料
细胞系VERO、MCF-7、SK-OV-3以及DU145均购自武汉大学保藏中心。
2.2 方法
2.2.1 MTT法检测细胞活力
用含有10%活性炭处理的胎牛血清（CS-FBS）的无酚红DMEM培养基培养细胞3d，收集处于对数生长期的细胞制成细胞悬浮液，并以14个细胞/mL左右的浓度接种到96孔细胞培养板中，于二氧化碳培养箱中37℃培养24h左右。当细胞密度达到50%时，加入不同浓度的药物，继续培养3d，然后分别加入MTT溶液（终浓度为1mg/mL），37℃培养4h。去除96孔板中的培养基后，每孔加入100μL的二甲亚砜，震荡10min，用酶标仪检测待测样品在570nm波长处的吸光值，并计算药物的半抑制率（IC50值）。
2.2.2 统计学方法
所有实验数据均用平均值±SD表示（n=3）。其中，IC50采用公式Y=100%抑制+（0%抑制-100%抑制）/（1+10[（logIC50-X）×斜率]），Y为光吸收值，X为log[抑制剂浓度]，通过Origin 8.0统计软件分析获得。
3 结果
3.1 OBHS和RAL抑制人乳腺瘤细胞MCF-7的活性
取不同浓度的RAL和OBHS分别作用乳腺癌细胞MCF-7和非洲绿猴肾的正常细胞VERO，3d后检测细胞活性。实验结果表明，当OBHS和RAL工作浓度上升至20μmol/ L时，MCF-7的细胞活性下降到50%以下（图1a），RAL和OBHS对MCF-7的抑制作用均具有浓度依耐性，其IC50值分别为15.9±0.30和20.1±1.16。此外，RAL对VERO的细胞活性也具有一定的抑制作用（图1b），其IC50为36.4±0.27;而OBHS对正常细胞的毒性较小，IC50值大于100（图1b），这表明OBHS的体外治疗指数要高于RAL。
3.2 OBHS和RAL抑制人卵巢癌细胞系SK-OV-3的活性
将不同工作浓度的OBHS和RAL分别作用SK-OV-3细胞系3d，检测细胞活性。实验结果显示，当RAL工作浓度上升到20μmol/L时，SK-OV-3细胞活性可以降至50%以下;而同样工作浓度的OBHS对细胞活性并无影响，只有当OBHS工作浓度上升至80μmol/L时，才具有类似的抑制效果（图2）。
3.3 OBHS和RAL抑制人前列腺癌细胞系DU145的活性
不同工作浓度的OBHS和RAL分别处理DU145细胞系3d，检测细胞活性。实验发现：RAL和OBHS对DU145细胞活性均有不同程度的抑制，其IC50值分别为：21.2±0.79和62.2±0.15。这表明OBHS只有在较高浓度时才对DU145细胞具有抑制细胞活性的作用（图3）。
4 讨论
选择性雌激素受体调节剂（SERMs）在不同的组织中通常表现出较为复杂的药理学特效。RAL是第二代SERM，被美国食品药品监督管理局（FDA）批准用于预防和治疗乳腺癌和男、女性的骨质疏松症[10]。OBHS是一种人工合成的选择性雌激素受体调节剂，它对ERa的选择性与雷洛昔芬（RAL）类似[8]，因此本研究比较了这两种药物对3种肿瘤细胞MCF-7、SK-OV-3和DU145的细胞活性的影响。
MCP-7、SK-OV-3以及DU145分别是人的乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌细胞系。在这3种细胞系中，它们的雌激素受体的表达情况并不相同。在MCF-7中ERα高表达，ERβ低表达;而在SK-OV-3和DU145细胞中，ERβ表达相对较高，ERα低表达或者几乎无表达。事实上，大量研究表明，ERα与肿瘤的恶性增殖、炎症及肿瘤的发展有关[11，12];而ERβ对细胞增殖的影响与ERα相反，有促进细胞凋亡的作用[13，14]。此外，有研究发现，在乳腺癌和前列腺细胞，RAL也能选择激活ERβ，从而发挥抑制细胞增殖的作用[15，16]。而在本研究中，RAL对SK-OV-3、DU145和MCF-7细胞活性均有较强的抑制作用。因此推测，RAL在ERp高表达的SK-OV-3和DU145细胞中也具有抑制活性，可能与其选择性ERβ激活的特性有关。但有意思的是，在体外转录激活实验中，OBHS属于ERβ的拮抗剂[8]。虽然低浓度的OBHS对DU145和SK-OV-3的细胞活性无明显影响，但是当OBHS浓度逐渐增大，OBHS也出现抑制肿瘤细胞活性的现象。由此可见，在前列腺癌和卵巢癌细胞中，OBHS的抗肿瘤细胞活性的作用机制可能与雷洛昔芬并不相同，具体的作用机制还有待进一步研究。
此外，本实验研究还发现，虽然OBHS和RAL均能抑制MCF-7细胞活性，且效果相近;但是RAL会抑制正常细胞的活性，而OBHS对正常细胞几乎无毒性作用。因此OBHS可能是一个相对安全，且具有抗肿瘤活性的化合物，具有潜在的应用前景。
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收稿日期：2019-10-14
基金项目：湖北省教育厅科研计划项目（编号，B2017304）
作者简介：邓丽娟（1974-），女，副教授，博士，研究方向为生物化学与分子生物学。