【摘要】化疗耐药是肿瘤化疗治疗中的一大问题，其中，多药耐药是一重要方向。作为ABC转运蛋白家族的关键因子，多药耐药蛋白（P-gp）的过表达，对靶目标药物浓度有着较大影响，导致耐药的产生。因此，本文主要就P-gp的结构、组织表达、药理机制以及对其抑制剂的研究进展进行简要综述。
【关键词】多药耐药；ABC转运蛋白；P-糖蛋白，抑制剂
【中图分类号】R969【文献标识码】B【文章编号】1005-0019（2015）01-0578-01
口腔恶性肿瘤中80%以上为鳞状细胞癌，口腔癌的治疗是以手术为主，以放化疗，中医，生物治疗等为辅的综合治疗。化疗是其中一种主要治疗方法。近年来随着化疗药物种类的增加，以及给药途径方式的多样，使得化疗效果得到有效提高，但在不同个体间观察疗效仍不理想[1]，研究发现癌细胞对多种化学药物的耐药性（multidrugresistance，MDR）是一个重要原因[2]，MDR是恶性肿瘤细胞在出现对一种抗肿瘤药物耐药的同时，对其他一些结构及作用机制不同的抗肿瘤药物，也产生耐药[3]。MDR包括天然性耐药和获得性耐药两种[4]，多药耐药问题是目前一个研究重点。其中ABC转运蛋白家族（ATP-bindingcassettetransportersuperfamily）与MDR密切相关。ABC跨膜蛋白可分为7个亚家族（ABCA-ABCG），其中参与肿瘤多药耐药的主要成员为ABCB、ABCC、ABCG等亚家族。多药耐药蛋白P-糖蛋白（P-gp），多药耐药相关蛋白（MRP），乳腺癌耐药蛋白（BCRP）都是重要的与药物相关ABC转运蛋白，他们家族中其最具有代表的是P-gp、MRP其过表达或活性增加可导致MDR的产生[5]。其中，目前国内外对P-gp的研究数量最多，范围最广。本文重点就P-gp在肿瘤耐药方面的最新相关研究进展做简要介绍。
1P-gp的相关研究
1.1.P-gp的发现及结构
1976年，Juliano等研究观察到肿瘤细胞株细胞膜上的一种膜蛋白过度表达，通过调节细胞膜的通透性。导致细胞内药物含量减少。随后，Kartner等对其进行证实，发现这种膜蛋白会影响细胞膜通透性，可以导致细胞内药物浓度降低，并产生细胞耐药。对该蛋白命名为P-糖蛋白。研究发现，它一种跨膜糖蛋白，是由人类第7号染色体上的Mdr1基因编码，起始密码子为AUG[6]，其翻译的氨基酸残基组成的140KD的单链跨膜蛋白，加上30KD的修饰糖链，总分子量为170KD，所以又称P-gp170蛋白；其结构由TMD1和TMD2（trans-membranedomain）两个疏水性跨膜结构域和两个核苷酸结合结构域NBD1和NBD2（nucleotide-bindingdomain）交叉排列组合。[7]
1.2.P-gp的组织表达
P-gp在多种肿瘤组织中都有不同程度的表达[8]，高表达的肿瘤有结肠癌、肾上腺肿瘤、肾癌、肝癌以及胰腺癌组织，在神经母细胞瘤、乳腺癌和急性髓细胞性白血病中呈现中度表达。低表达的是卵巢癌、食道癌、肺癌等。在口腔鳞癌组织中P-gp也有适度表达。P-gp不仅分布于肿瘤组织中，在正常组织中有清除异物、代谢物的功能，多分布于靠近脏器腔面[9]，在肾上腺、肝脏、空肠、回肠、结肠等正常组织中有高表达；位于血脑屏障组织的P-gp，能够防止化疗药等外源性药物进入脑组织，对正常组织有保护作用。[10，11]
1.3.P-gp的功能和药理机制
P-gp可以与目标药物结合，借ATP释放出的能量，直接或间接将药物泵出细胞，或依靠其蛋白本身，作为运输通道，将药物从细胞内泵出细胞外，最终导致降低细胞内药物浓度，降低或丧失目标药物的药效。研究发现P-gp它对天然的疏水性药物有较强的作用，包括长春碱、蒽环类、依托泊苷、紫杉醇等。总结其作用方式[12]：①当药物被动扩散进入细胞后，在胞浆面与P-gp结合并被泵至细胞外。这是一种最常见的方式，还有其他两种机制是：②一些亲脂性药物，在其穿过细胞膜所需的时间较长，在胞膜的脂质双分子层之间就与P-gp相结合，药物在还未进入细胞内就被泵出细胞外，这是就是一种“疏水真空泵”的作用方式，③细胞质内膜上也存在P-gp，使进入细胞内的药物进行再分布，将药物富集于药物作用无关的细胞器内，从而降低靶细胞器部位的药物浓度。通过以上这些药理机制，达到细胞内的药物蓄积减少；造成细胞内靶器官药物浓度减低，致使药物的毒性作用下降甚至完全丧失，使细胞产生耐药性。最终提高肿瘤细胞存活率，延迟凋亡级联反应。
2P-gp抑制剂的研究
2.1化学药物逆转P-gp
自从1981年Tsuruo等发现维拉帕米（verapamil）能降低转运作用，因其可以与抗癌药物对ABC转运蛋白形成竞争关系，最终降低MDR作用。随后研究，也发现一些非特异性的MDR逆转剂，如环孢素A、红霉素等。但这些逆转剂对目标蛋白的亲和力低，且所需药物剂量大，具有高毒性，在临床应用中受到限制。如：VX-710可使该药物对血脑屏障的ABC转运蛋白进行抑制，降低中枢神经系统的防御力，增加毒副作用[13]，因为它能具有高逆转率，低特异性，可作用目标组织的同时抑制某些正常组织的ABC转运蛋白，使正常组织细胞的防御作用降低。随着科技的发展和对此领域的不断探索，人们合成出二苯基甾烷类衍生物LY335979，是迄今发现的最强的P-gp抑制剂之一。此后合成的邻氨苯甲酸的新型衍生物XR9576，具有极强的逆转活性和对P-gp高度的选择性，同时还能抑制P-gp的ATP酶活性。体内实验表明，可显著增强细胞毒类药物的疗效，并不影响这些药物的药代动力学。在临床试验中也取得较好效果[14]。
近来研究发现许多小分子酪氨酸激酶抑制剂[15-18]，他们的分子机制可以抑制ABC转运蛋白的ATP酶活性，干扰转运蛋白向外泵药的功能，以此来增加细胞内抗癌药物浓度。5-溴代汉防己甲素（W198）[19]可抑制ATP酶活性，又可以干扰P-gp的转运功能，但W198对P-gp的基因表达水平无影响。可达到增加细胞内药物的浓度，减少P-gp介导的药物外排。随着研究的深入，技术的提升，不断对其进行合成改造，力求合成活性强且毒副作用低的逆转剂，从而增加化疗效果。
2.2植物药物逆转P-gp
自然界存在成千上万种天然物质，其对疾病的治疗有着重要的作用，中医药就是其重要应用，通过尝试研究发现，当植物类药物与P-gp发生作用时，可以影响P-gp编码基因MDR1的表达，导致P-gp的表达变化；进而影响P-gp参与体内、外源药物和毒素的吸收、分布和排泄功能。姜黄（Curcuma）是一种传统的中草药，近来有研究表明[20]，体外实验中姜黄素降低P-gp和MDR1基因mRNA表达水平，进而降低P-gp的功能活性。银杏种子-白果是一味重要的中药，有化痰、平喘等药用价值，其提取物白果银杏，是孕烷X受体的一个新的激动剂，它可通过激动孕烷X受体，和P-gp发生作用。体内试验中，将白果银杏与P-pg所介导底物同时服用，其药峰浓度增加了51%，药时曲线下面积（AUC）0-24增加了47%。这些都表明了银杏提取物在人体内可以抑制P-gp功能[21]，中药五味子提取物五味子素B，它是P-gp的一个新的天然抑制剂，体外实验显示，它既能抑制P-gp的特异性过表达，又可抑制P-gp转运功能，降低胞内药物外排，提高药物浓度[22]。白藜芦醇抗肿瘤活性研究发现，它对干细胞癌，卵巢癌，黑色素瘤等有明显抑制作用[23]，还可通过拮抗PXR，影响P-gp的基因活性和其蛋白表达[24]。灵芝在中药中作为滋补强壮、扶正固本类，它可提高机体的免疫力。其主要有效成分灵芝多糖肽（GLPP）具有抗肿瘤作用[25]，可抑制血管内皮细胞增殖和肿瘤细胞的侵袭，诱导肿瘤细胞凋亡[26]，研究发现GLPP可抑制Caco-2细胞上P-gp的功能以及表达水平。相比经典抑制剂维拉帕米，虽GLPP作用稍弱于维拉帕米[27]，但毒副作用明显小，拥有天然药物在多靶点，多通路抑制的优点，且副作用小等优势。通过抑制P-gp的功能可逆转耐药细胞的化疗抵抗性[28]
3结语
现国内外相关研究发现肿瘤多药耐药的分子机制异常复杂，是涉及基因突变、相关蛋白表达、酶类介导、细胞凋亡功能失常等多种因素参与的复杂过程[29]。多年的研究，发现与肿瘤耐药相关转运蛋白，从而发现某些药物可以抑制其基因以及其蛋白的表达，但在多年的研究实践中，认识到一些P-gp抑制剂，在靶目标作用的同时，可能对正常组织有同样的抑制，产生副作用。比如，P-gp抑制剂作用体内，可能会抑制肝脏中高表达的P-gp，从而降低肝脏解毒作用[30]。在临床治疗肿瘤中，达到逆转肿瘤MDR，研究相关抑制剂有着重要的研究意义。我们祖国医学在肿瘤治疗中有着独到的见解，我们可以使用天然中草药的特性，运用其在多靶点、多环节、多途径的药用价值，达到抑制相关基因表达、降低相关蛋白功能、增加机体免疫力等疗效，加之天然药物作用范围广、不良反应低、且不易产生耐药等优势，其抗肿瘤作用，已得到越来越多的国内外关注，成为一大研究的热点[31]。
参考文献
[1]LiX，LewisMT，HuangJ，etal.Intrinsicresistanceoftumorigenicbreastcancercellstochemotherapy，JNatlCancerInst2008；100（9）：672-679.
[2]BastJrRC，HennessyB，MillsGB.Thebiologyofovariancancer：newopportunitiesfortranslation[J].NatRevCancer，2009，9（6）：415-428.
[3]MoulderS.Intrinsicresistancetochemotherapyinbreastcancer[J].WomensHealth（LondEngl）2010；6（6）：821-830.
[4]张蓉，司徒红林，陈前军等.乳腺癌多药耐药机制及其逆转剂的研究.中华实用医药杂志，2006，6（17）：1558-1561
[5]ShiLu，QiHuang，ZehuaWang，etal.Reversalofmulti-drugresistancebyvector-based-ShRNA-Mdr1InVitroandInVivo[J].JournalofHuazhongUniversityofScienceandTechnology[MedicalSciences]，2009，Vol.29（5），pp.620-624.
[6]GottesmanMM，FojoT，BatesSE.Targetingmultidrugresistanceincancer[J].NatRevCancer，2006，5：219-234.
[7]StephenGA，JodieY，AndrewW，etal.StructureofP-glycoproteievealsamolecularbasisforpoly-specificdrugbinding[J].Science，2009，323：1718-1722.
[8]MarzoliniC，PausE，BuclinT，etal.Polymorphisms？inhumanMDR1（P-glycoprotein）：recentadvancesandclinicalrelevance[J].ClinPharmacolTher，2004，？75（1）：13-33.
[9]聂昊，王晖.P糖蛋白在不同组织中的分布与功能研究进展[J].广东药学院学报2012；28（4）：457-459.
[10]PollerB，DreweJ，KrhenbühlS，etal.RegulationofBCRP（AB-CG2）andP-glycoprotein（ABCB1）bycytokinesinamodelofhehumanblood-brainbarrier.CellMolNeurobiol，2010，30：63-70.
[11]BansalT，JaggiM，KharRK，etal.EmergingsignificanceofflavonoidsasP-glycoproteininhibitorsincancerchemotherapy.JPharmPharmSei2009；12（l）：46-78.
[12]涂春华，杨冬梓.P-糖蛋白结构及作用机制[J]，中国生物化学与分子生物学报ChineseJournalofBiochemistryandMolecularBiology，2009年1月25（1）：7～11
[13]GandhiL，HardingMW，NeubauerM，etal.AphaseIIstudyofthesafetyandefficacyofthemultidrugresistanceinhibitorVX-710combinedwithdoxorubicinandvincristineinpatientswithrecurrentsmallcelllungcancer[J].Cancer，2007，109：924？932.
[14]FoxE，BatesSE.Tariquidar（XR9576）：aP-glycoproteindrugeffluxpumpinhibitor[J].ExpertRevAnticancerTher，2007，7：447？459.
[15]SuneetShukla，Zhe-ShengChen，SureshV.Ambudkar，TyrosinekinaseinhibitorsasmodulatorsofABCtransporter-mediateddrugresistance[J].DrugResistanceUpdates，2012，Vol.15（1-2），pp.70-80。
[16]林丽珊，陈笑艳，钟大放，外排转运体对酪氨酸激酶抑制剂体内处置过程的影响[J]，国际药学研究杂志，2014年2月第41卷第1期：75-82
[17]ShiZ，TiwariAK，ShuklaS，etal.InhibitingthefunctionofABCB1andABCG2bytheEGFRtyrosinekinaseinhibitorAG1478[J].BiochemPharmacol，2009，77：781？793.
[18]TaoLY，LiangYJ，WangF，etal.Cediranib（recentin，AZD2171）reversesABCB1-andABCC1-mediatedmultidrugresistancebyinhibitionoftheirtransportfunction[J].CancerChemotherPharmacol，2009，64：961？969.
[19]魏宁，孙华，刘耕陶，基于ATP-结合盒转运蛋白逆转肿瘤多药耐药的研究进展[J].ActaPharmSin（药学学报），2010，45（10）：1205-1211
[20]HouaXiaolong，KyokoT，KenT，etal.Curcumadrugsandcur-cumiegulatetheexpressionandfunctionofP-gpinCaco-2cellsincompletelyoppositeways[J].IntJPharm，2008，358（2）：224-229.
[21]YeungEY，SueyoshiT，WangD，etal.IdentificationofGinkgobilobaasanovelactivatorofpregnaneXreceptor[J].DrugMetabDispos，2008，36（11）：2270-6.
[22]PanQiangrong，WangTao，HuXun，etal.SchisandrinB—AnovelinhibitorofP-glycoprotein[J].BiochemBiophysResCom-mun，2005，335（1）：406-411.
[23]刘浩，蒋琛琛，程秀等。白藜芦醇对黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响[J].中国药理学通报Chinesepharmacologicalbulletin，2011；27（7）：998-1002
[24]邓蓉蓉，毕惠嫦，金晶等；白藜芦醇通过拮抗hPXR对P-gp的影响[J]，中国药理学通报Chinesepharmacologicalbulletin，2013Apr；29（4）：501-506
[25]XuZ，ChenX，ZhongZ.Ganodermalucidumpolysacharides：immunomodulationandpotentialanti-tumoractivities[J].AmJChinMed，2011，39（1）：15-27.
[26]曹琦珍，林树钱，林志彬.灵芝多糖肽对人肺癌细胞侵袭的影响[J].北京大学学报：医学版，2007，39（6）：653-656.
[27]吴芬，成日华，李焕德.灵芝多糖肽对Caco-2细胞上P糖蛋白功能、表达的影响[J].中南药学2012年5月第10卷第5期，334-338
[28]JoveletC，BenardJ，ForestierF，etal.InhibitionofP-glycoproteinfunctionalitybyvandetanibmayreversecancercellresistancetodoxo-rubicin[J].EurJPharmSci，2012，46（5）：484-491.
[29]TylerJ.Curielimmunotherapy：Ausefulstrategytohelpcombatmultidrugresistance[J].DrugResistUpdate，2012，15（1/2）：106.
[30]沈小玲，胡英杰，禹志领等.中药逆转p-糖蛋白介导的肿瘤多药耐药的研究进展[J]，中国天然药物，2009，7（6）：465-475）。
[31]齐元富，聂奔，李慧杰.中药逆转肿瘤多药耐药的前景探讨[J].中医杂志，2012，53（6）：476.