[中图分类号]R714.146[文献标识码]B[文章编号]1672-4208(2008)10-0041-02
母婴垂直传播是乙型肝炎病毒（HBV）感染的重要途径，也是人群中大量HBV慢性携带者形成的重要原因。寻找有效阻断HBV母婴垂直传播的预防措施已成为世界上控制乃至消灭乙肝的关键性课题。HBV阳性孕妇孕期肌注乙肝免疫球蛋白，（HBIG）可有效的预防HBV母婴垂直传播，但其作用机理尚不明确。本研究测定了60例HBsAg阳性孕产妇外周肘静脉血清乙肝标志物（HBVM）、HBV DNA含量和细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-12（IL-12）、IL-6水平并比较了30例HBsAg阳性孕妇孕期应用乙肝免疫球蛋白(HBIG)治疗前后外用血清HBV DNA 含量的变化，以探讨HBV阳性孕妇孕期应用HBIG治疗预防HBV宫内感染的分子生物学作用机理，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 将2005年2月~2006年8月，在我院门诊行产前检查、随访和分娩的HBsAg阳性孕妇60例随机分为两组：预防组30例，于孕28、32、36周肌肉注射HBIC 3次，每次肌注200 IU；对照组30例，只随访查体不用药。所选病例孕期无先兆流产或先兆早产及妊高征史，无肝炎史、症状或体征，肝功能正常，两组孕妇年龄、孕产式、分娩时胎龄、分娩方式差异均无显著性，其丈夫均排除携带HBV。60例孕妇共分娩新生儿60名。
1.2 方法
1.2.1 标本采集及处理 （1）于孕28周前采集2组孕妇外周肘静脉血各2 ml，注入盖消毒普通试管，离心前置4 ℃冰箱保存，6 h内以3000 r／min离心15 min，分离血清检测HBVM及HBV DNA含量，分娩时采孕妇外周肘静脉血2 ml，用前法离心后取部分血清测定HBVDNA含量，另一部分-80 ℃冻存，一并检测IFN-γ 、IL-12、IL-6水平；（2）新生儿血标本的采集：分娩时在无菌条件下留取脐静脉血2 ml，用前法分离血清定量检测HBVM及HBV DNA。
1.2.2 检查方法 （1）乙肝5项指标的测定：采用双抗夹心ELISA法。试剂（产自厦门泰伦生物工程有限公司）检测仪器为美国。DENLEy自动酶标洗板机，BEO-RAD450酶标仪，操作步骤及结果按照说明书；（2）HBVDNA定量检测采用荧光定量PCR法，试剂（由中山医科大学达安基因诊断中心提供）。标本为HBVDNA含量以COpy／ml表示；（3）IFN-γ、IL-12、IL-6水平的测定，均采用双抗夹心ELISA法。试剂为美国TPI公司原装进口产品。W-4自动洗板机为芬兰Labsystem公司产品，CB372酶标仪为美国DYNEX公司生产。操作步骤按说明书进行。
1.3 新生儿HBV宫内感染定义 新生儿脐血清HBsAgHBV DNA任一项阳性即诊断为宫内感染。
1.4 统计学处理 采用七检测， χ2检验。
2 结果
2.1 新生儿宫内感染率 60例HBsAg孕妇所分娩的新生儿宫内HBV感染8例，宫内感染率11.18%，孕妇应用HBIG可降低胎儿HBV感染率，孕妇HBEG预防组胎儿HBV感染率显著低于对照组，差异有显著性（0R~6.69,P＜0.05）。见表1。
2.2 新生儿脐血清抗-HBS检出率 新生儿脐血清抗-HBS检出率与孕妇应用HBIG预防呈相关性,预防组新生儿脐血清抗-HBS检出率显著高于对照组,差异有高度显著性（OR—23.5,P＜0.001）。见表2。
2.3 HBIG预防治疗对孕妇血清中IFN-γ，IL-12，IL-6水平及HBVDNA含量的影响预防组孕妇HBIG治疗前后血清中HBVDNA含量的几何均数分别为7.11±0.43、5.21±0.25差异有显著性（P＜0.05），预防组孕妇IFN-γ，IL-12水平显著高于对照组，IL-6水平，HBVDNA含量则显著低于对照组，差异有显著性（P＜0.05），见表3。
3 讨论
新生儿接种乙肝疫苗（HB）阻断HBV母婴传播的作用已被充分肯定，但仍有1%~2%的母婴传播阻断失败。宫内感染的主要原因为减少HBV宫内感染，提高乙肝疫苗接种效果，近年来有学者进行了阻断HBV宫内传播的研究，朱启镕选择孕妇HBV无症状携带者，随机分为两组，实验组临产前3个月每月注射HBIG200IU，共3次，对照组不注射时，于新生儿出生时抽血作血清学检测，结果显示，实验组与对照组分娩新生儿宫内感染率分别为5.7%和14.3%，差异有显著性（P＜0.01），提示孕妇产前，多次肌注HBIG可减少HBV宫内感染的发生。本研究结果亦提示预防组胎儿HBV感染率显著低于对照组，我们认为孕妇HBIG被动免疫预防HBV宫内感染的机制如下。
机体内HBV的清除与其免疫状态密切相关，而机体的免疫状态主要是指细胞免疫反应，其中有诸多细的因子参与T淋巴细胞免疫重组，T辅助细胞（Th细胞）是机体一类重要的免疫调节细胞，根据其产生细胞因子的不同，分为Th1、Th2、Th0三类。Th1细胞主要产生干扰素γ(IFN-γ）、IL-12、IL-2等细胞因子，增强机体细胞免疫应答；IFN-γ除有增强机体抗病毒能力外还具有重要的免疫调节作用，IL—12能增强机体Th1细胞的活性，促进IFN-γ分泌，提高机体抵抗HBV内感染能力，有利于清除HBV。本研究首次发现，预防组孕妇经HBIG治疗后IFN-γ、IL-12水平显著高于对照组孕妇，而IL-6水平与HBV DNA含量则显著低于对照组孕妇，说明HBIG与Th1型细胞活化有关。通过增加Th1型细胞的活化，促进体内IFN-γ、IL-12分泌有利于孕妇体内HBV的清除，降低其体内HBVDNA含量，有效降低了胎儿HBV的水平，本研究组还发现，预防组孕妇经HBIG治疗后体内HBVDNA含量显著下降。也可能与HBIG可中和孕妇体内HBVDNA减少孕妇外周血中HBVDNA含量有关。
参 考 文 献
［1］朱启镕，吕睛，俞惠，等.宫内感染HBV婴儿接种乙肝疫苗失败的机理和预后研究[J].中华儿科杂志，2002.
［2］张树林，杨晓菊，岳亚飞.乙肝免疫球蛋白阻断HBV宫内感染的作用机理[J].中华实验和临床病毒学杂志，2002.
（收稿日期：2008-03-10）