摘要 免疫荧光技术是标记免疫技术中应用最为广泛的一项技术，具有特异性强、灵敏度高、速度快和便于观察等特点。影响免疫荧光染色质量的因素多种多样，从荧光染料、抗体、样品前处理、染色过程等几个重要的方面入手，就如何提高免疫荧光染色质量，以获得一张高分辨率的图片做了详细的介绍。该研究有利于提高免疫荧光染色质量，为生命科学研究提供了有力帮助。
关键词 免疫荧光染色技术;抗体;影响因素
中图分类号 Q2-33文献标识码 A
文章编号 0517-6611（2019）16-0124-03
doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.16.036
开放科学（资源服务）标识码（OSID）：
Influencing Factors of Quality of Immunofluorescent Staining Technology
SONG Rui long，ZHOU Zi yan，XU Tian qi et al （College of Veterinary Medicine，Yangzhou University/Jiangsu Co innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses，Yangzhou，Jiangsu 225009）
Abstract As one of the most widely used immunolabeling techniques，immunofluorescence has several advantages including high specificity，high sensitivity，rapid detection and clear positioning. However，the quality of immunofluorescent staining could be affected by multiple factors，such as fluorescent dyes，antibodies，sample preparation and staining process.Starting with those vital factors，we introduced how to improve the quality of immunofluorescent staining so as to obtain a high resolution image in detail.This study improved the quality of immunofluorescent staining and provided powerful help for life science research.
Key words Immunofluorescent cell staining technology;Antibody;Influencing factor
免疫荧光染色技术是一种以免疫学为基础，结合生物化学技术和显微技术发展而来的蛋白等分子检测技术。这种技术是Coons等在1941年首先建立的，尤其近三十幾年来，免疫标记技术和检测技术有了长足的进步，其稳定性、灵敏性和特异性都有了飞速的发展。免疫荧光染色技术作为一种科学研究的技术手段，已被广泛应用于细胞生物学、微生物学、寄生虫学、免疫学等科学研究，以及临床诊断方面[1-5]。因此，提高免疫荧光染色质量尤为重要。
免疫荧光技术利用了抗原与抗体高度特异性结合的原理，将某种可测定的物质偶联到抗体或者抗原上，通过检测标记物的有无和含量，对样品中待检抗原或抗体进行定性、定位和定量检测。物质原子核外电子具有多个不同大小的能级，最低能级称为基态。当光子能量等于2个不同能级的能量差时，低能级电子吸收光子能量后，跃迁至高能级的激发态。激发态极不稳定，会向低能级状态跃迁，释放出不同能量的光子，这些光子能够通过荧光显微镜检测到，进而对检测物质进行定性、定位、定量等检测[6]。荧光物质在持续受到激发光激发后，由于不能够恢复到基态，从而导致荧光强度减弱或淬灭。免疫荧光染色技术包括试验准备阶段、染色过程和样品拍摄，以下将从荧光染料、抗体、样品前处理、染色过程等方面阐述如何提高免疫荧光染色的质量，以获得高清晰度的图片。