摘要：为掌握青海省湟源县近几年鸡新城疫疫苗的免疫效果，本研究采用血凝抑制试验（HI）方法对2014～2016年湟源县新城疫疫苗免疫后的3242份血清样品进行了检测与分析，结果共检出阳性样品2966份，平均免疫合格率为91.49 %，免疫合格率自2014～2016年逐步升高，规模养殖场的免疫合格率高于散养户。
关键词：鸡；新城疫；免疫抗体；监测；分析
中图分类号：S858.31 文献标识码：B文章编号：2095-9737（2017）10-0003-01
鸡新城疫（ND）是由鸡新城疫病毒（NDV）引起的一种急性、热性、败血性、烈性传染病，我国采取以疫苗免疫为主的综合防控措施，有效控制了该病在国内的大规模流行，但新城疫疫苗免疫失败现象仍时有发生[1]。为掌握近年来湟源县鸡新城疫疫苗的免疫现状，及时发现新城疫防控工作中的薄弱环节以及疫情隐患，确保新城疫疫苗的免疫效果，笔者采用血凝抑制试验（HI）方法对2014～2016年湟源县鸡新城疫疫苗免疫后的抗体水平进行了监测与分析。
1 材料与方法
1.1 血清样品来源
于2014～2016年期间共采集湟源县鸡新城疫疫苗免疫后的血清样品3242份。
1.2 试剂和仪器
鸡新城疫血凝抑制抗原、阳性血清、阴性血清购自青岛易邦生物工程有限公司；1-14小型台式离心机为SIGMA公司产品；量程为5～50 μL可调八道移液器为Thermo公司产品；ZW-A型微量振荡器为常州华冠仪器有限公司产品；一次性96孔“V型”微量反应板为南通市卫宁实验器材有限公司产品。
1.3 血清样品的制备
利用一次性1.0 mL注射器从免疫鸡的翅静脉处采集血液0.5～0.8 mL，将其全部打入1.5 mL离心管中，将离心管依次置于37 ℃温箱1 h，2～8 ℃冰箱2 h后，3000 r/min离心10 min，小心吸取上清液存入另一个1.5 mL离心管中，即得血清样品，-20 ℃保存备用。
1.4 血凝抑制试验（HI）操作方法与判定标准
1.4.1 1%鸡红细胞悬液的制备
在一次性5.0 mL注射器中吸入2.0 mL抗凝剂后，于健康公鸡翅静脉处采集血液2.0 mL，分别采集3只公鸡，将3只鸡抗凝血液全部置于50 mL离心管中，加入10倍体积的0.01 mol/L、pH 7.2的灭菌PBS，混合均匀，2000 r/min离心10 min，小心吸取上清液舍弃，下层红细胞用40.0 mL灭菌PBS重悬，2000 r/min离心10 min，上清液舍弃，利用灭菌PBS将下层红细胞配制成1%鸡红细胞悬液，4 ℃保存备用，于配置当天用完。
1.4.2 4个血凝单位抗原的制备
在96孔微量板的各孔加入25 μL灭菌PBS，取25 μL鸡新城疫血凝抑制抗原加入第1孔内，混匀后吸取25 μL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，各孔分别加入25 μL 1%鸡红细胞悬液，微量振荡器上摇匀，室温静置30 min后观察结果，紅细胞完全凝集的最高稀释度即为抗原的血凝效价。将抗原的血凝效价除以4即得4单位抗原的稀释倍数，利用灭菌PBS配置4单位抗原。
1.4.3 抗体效价的测定
在96孔微量板的各孔加入25 μL灭菌PBS，取25 μL血清样品加入第1孔内，混匀后吸取25 μL至第2孔，依次倍比稀释至第10孔，1～11各孔分别加入25 μL 4单位抗原，微量振荡器上摇匀，室温静置30 min。各孔分别加入25 μL 1%鸡红细胞悬液，微量振荡器上摇匀，室温静置30 min后观察结果，完全抑制4单位抗原凝集的血清最高稀释度即为检测样品的HI抗体效价（log2），当血清样品HI抗体效价≥4 log2判为阳性，<4 log2判为阴性。
2 结果与分析
2.1 不同年份的检测结果
如表1所示，共检出阳性样品2966份，平均免疫合格率为91.49%（2966/3242），其中2014年、2015年、2016年免疫合格率分别为88.25%（976/1106）、92.07%（940/1021）、94.17%（1050/1115），免疫合格率自2014～2016年呈现出逐步升高的趋势。
2.2 不同养殖方式的检测结果
如表2所示，规模场的免疫合格率为94.54%（1905/2015），散养户的免疫合格率为86.47%（1061/1227），规模养殖场的免疫合格率较散养户高出8.07个百分点。
3 讨论
疫苗免疫后抗体水平检测可有效判断疫苗的免疫效果，本次新城疫免疫效果监测覆盖了湟源县2014～2016最近3年的时间跨度，并且分别从养殖场和散养户进行抽样检测，监测结果能够较好的反映出目前湟源县新城疫疫苗的免疫效果。本次调查平均免疫合格率为91.49%，远远超过了农业部规定的免疫合格率在70%以上的标准。与国内其他地区相比，也远远高于甘肃宁县2015年平均为76.31%免疫合格率[2]，略高于福建浦城县2015年总体为91.287%的免疫合格率[3]。表明湟源县已全面开展鸡新城疫的免疫工作，疫苗免疫程序比较合理，疫苗免疫效果较好。但本次调查中发现湟源县规模养殖场的平均免疫合格率较散养户高出8.07个百分点，究其原因可能为：①在防控意识上，规模场的防控意识更强，投入了大量的人力财力，而散养户的防控意识较淡薄，少免、漏免等情况时有发生；②在技术水平上，养殖场有兽医专职人员负责防疫，技术水平较高，且经常进行抗体检测，能准确把握免疫时机，而散养户做不到抗体的实时监测，无法掌握免疫前的抗体水平，往往盲目免疫；③在养殖环境上，规模场的饲养管理与环境卫生均明显好于散养户，鸡群的免疫力和抗病力较好，可有效降低免疫失败。故对散养户定期组织培训，提高其防疫意识和技术水平，逐步引导其向规模场方向发展已十分棘手和必要。
参考文献：
[1] 张贺楠，张钊伟，于雷，等.一株鸡新城疫强毒株的分离及生物学特性鉴定[J].黑龙江畜牧兽医，2016（2）：156-158.
[2] 黄刚，李引乾，冶冬阳.2015年甘肃宁县口蹄疫、猪瘟、鸡新城疫免疫抗体检测与分析[J].动物医学进展，2016，37（10）：123-126.
[3] 吕国荣.浦城县2015年鸡新城疫免疫抗体监测分析[J].现代畜牧科技，2016（9）：171.