广东地区16336例地中海贫血初筛阳性样本基因型分析

规范要求如下：采集2～3 mL EDTA抗凝血后，行血常规测定，以平均红细胞体积（MCV）≤82 fL[7]和/或平均红细胞血红蛋白含量（MCH）≤27 pg[8]作为筛查阳性指标。夫妇双方均为阳性时，转移血样到采集卡上，干燥后3 d内送至广东省计划生育专科医院优生技术中心检测。采用潮州凯普血液基因组DNA提取试剂盒对采集卡样本进行DNA提取，用潮州凯普提供的α-和β-地贫基因检测试剂盒（PCR+膜杂交法）进行基因检测，严格按说明书中步骤操作。

1.3 地贫基因检测结果判读

地贫基因反向斑点杂交膜条设3个α和6个β正常对照点，可检测3种α地贫缺失型基因（SEA、3.7、4.2）、3种突变型基因（CS、QS、WS）及15种常见β地贫突变型基因[-28（A-G）、-29（A-G）、Cap（-AAAC）、Int（T-G）、CD14/15（+G）、CD17（A-T）、βE（G-A）、CD27/28（+C）、CD31（-C）、CD41/42（-TTCT）、CD43（G-T）、CD71/72（+A）、IVS-I-1（G-T，G-A）、IVS-I-5（G-C）、IVS-II-654（C-T）]。每次实验所有正常对照点均应显色，突变纯合子及缺失纯合子除外。

图1为膜条上各杂交位点对应图，出现地贫基因突变、缺失时在相应位置会出现杂交信号。图2～5为不同类型地贫基因携带者的杂交图。

1.4 数据分析

采用SPSS 19.0统计学软件进行分析，采用描述性统计方法描述地贫筛查的准确率和各种基因型分布情况。

2 结果

2.1 地贫筛查及基因分型情况

广东地区育龄夫妇经血常规筛查（MCV和MCH）疑似地贫16 336例（8168对），经基因诊断明确13 068例，筛查阳性率为80%（13 068/16 336）。α地贫基因携带者9280例，其中，标准型6852例（41.94%），静止型1529例（9.36%）；β地贫基因者携带4441例，单纯β地贫基因3788例（23.19%）；Hb H病241例（1.48）；α复合β地贫653例（4.00%）；香港型地贫5例（0.03%）。见表1。

2.2 α地贫基因突变类型及其构成比

受检的16 336人中检出α-地贫9280例，包括α复合β地贫基因携带者，大部分为--SEA/αα型（76.15%），其次为-α3.7/αα（10.13%）及-α4.2/αα（4.63%）。见表2。

2.3 β地贫基因突变类型及其构成比

受检16 336人中检出β地贫4441例，包括α复合β地贫基因携带者，共检出23种β地贫基因突变类型，最常见突变类型为β41-42/β（39.59%），其次为β654/β（25.08%）、β-28/β（16.89%）及β17/β（9.01%）。见表3。

2.4 α复合β地贫基因突变类型及其构成比

受检16 336人中检出α复合β地贫基因携带者653例，占4.00%，以--SEA/β41-42（17.15%）最常见，其次为--SEA/β654（13.48%）及-α3.7/β41-42（11.18%）。见表4。

3 讨论

地贫是世界上最常见且发病率最高的单基因遗传病之一，现阶段尚无理想治疗方法，本病重在预防，产前筛查结合基因检测技术是降低重症地贫儿出生的重要手段。广东省为地贫高发省份之一，每年新增重型和中间型地贫患儿约4000例[9]。数据显示，广东省人群地贫基因平均携带率约11%，在部分地区可高达16%～20%[1]，其中α地贫和β地贫基因携带率分别为8.30%～8.85%[4，10]和3.36%～3.73%[10-11]。本研究以MCV≤82 fL和/或MCH≤27 pg联合作为地贫筛查阳性的指标，在进行地贫基因检查的16 336例地贫疑似样本中，基因诊断确诊13 068例，筛查总阳性率为80%，敏感度和特异性较好。也有研究提示，在基层医院中可单纯将MCV作为筛查指标，阳性患者再进行HbA2检测，可减少患者负担，并有较高灵敏度[12]。

α-地贫是第16号染色体短臂末端α珠蛋白基因缺陷所致，有缺失型和非缺失型两种，中国人群以缺失型為主[13]，常见东南亚型缺失（--SEA）、右侧缺失（-α3.7）和左侧缺失（-α4.2）。β-地贫为位于染色体11p15.5上的β-珠蛋白基因发生核苷酸的缺失、插入或置换，目前发现的β地贫基因突变超过200种，中国人β地贫基因突变类型有34种[14]，广东省已检出20多种。本研究采用导流杂交技术和低密度基因芯片技术可同时检测3种α-珠蛋白基因缺失、3种α-珠蛋白基因突变以及15种β-珠蛋白基因突变，突破性解决了α-地贫基因缺失无法和突变检测兼容、无法和β-基因突变同步检测的问题，同时也提高检测特异性和灵敏度。本研究受检者共16 336人，检出α-地贫9280例，阳性率为56.8%，常见的3种类型--SEA/αα型、-α3.7/αα及-α4.2/αα占α地贫阳性对象的90.26%，与国内同类研究结果吻合[15-17]；检出β地贫4441例，阳性率为27.19%，共检出23种β地贫基因突变类型，常见为β41-42/β、β654/β及β-28/β，占β地贫阳性对象的81.56%，与广东省内同类研究结果基本吻合[18-19]；检出α复合β地贫基因携带者653例，筛查阳性率为4.00%，发生频率依次为--SEA/β41-42（17.15%）、--SEA/β654（13.48%）及-α3.7/β41-42（11.18%）。说明αβ复合基因突变在广东地区人群中的发生率较高，此类人群血液筛查的表现多以β地贫为主，α地贫的表现被掩盖[20]，临床易漏诊，故对于疑似β地贫者，应同时进行α地贫和β地贫基因检测，以防漏诊。

本研究涉及检测样本量大，时间跨度长，采样点多达130个，采样具有一定的普遍意义。结果较好的反映出广东地区地贫基因分子流行学现状，对降低本地区地贫发生率有一定的指导意义。

[参考文献]

[1] Jimenez-Sanchez G，Childs B，Valle D. Human disease genes [J]. Nature，2001，409（6822）：853-855.

[2] Angastiniotis M，Modell B. Global epidemiology of hemoglobin disorders [J]. Ann N Y Acad Sci，1998，850（1）：251-269.

[3] 胡兰萍，王卫红，贺骏，等.长沙地区10987例育龄人群地中海贫血筛查结果分析[J].中国优生与遗传杂志，2014（3）：22-23.

[4] 肖维威，徐铃.中国人缺失型α-地中海贫血的分子基础及产前基因诊断[J].第一军医大学学报，1998，18（1）：68-72.

[5] 包碧惠，胡华，常青.地中海贫血临床诊断进展[J].现代生物医学进展，2008，8（5）：979-981.

[6] 李铭臻，潘干华，周冰燚，等.β地中海贫血筛查中MCV可靠性的分析[J].中国优生与遗传杂志，2014（5）：22-23.

[7] Alhamdan NA，Almazrou YY，Alswaidi FM，et al. Premarital screening for thalassemia and sickle cell disease in Saudi Arabia [J]. Genet Med，2007，9（6）：372-377.

[8] 肖国宏，李蔼文，李少英，等.血液学指标和Hb电泳及RBC脆性对地中海贫血与缺铁性贫血的诊断价值[J].中国妇幼保健，2006，21（15）：2146-2149.

[9] 黄绍良.防治地中海贫血应始于婚前[J].科技文萃，2005（1）：94-95.

[10] 申芜子，李哲刚，潘干华，等.广东省佛山市新婚育龄人群α地中海贫血的分子流行病学调查[J].中国计划生育学杂志，2010（1）：31-33.

[11] Xu X，Liao C，Liu Z，et al. Antenatal screening and fetal diagnosis of beta-thalassemia in a Chinese population： prevalence of the beta-thalassemia trait in the Guangzhou area of China [J]. Hum Genet，1996，98（2）：199-202.

[12] 李莉艳，常清贤，靳旺杰，等.MCV、MCH、HbA2在妊娠期珠蛋白生成障碍性贫血筛查中的临床应用价值[J].中国医学前沿杂志：电子版，2015，7（12）：1-4.

[13] 黄义强.地中海贫血孕妇的产前筛查与基因诊断研究[J].亚太传统医药，2009，5（9）：101-102.

[14] 石西南.中国不同省区β地中海贫血基因变异的分布特征[J].医学综述，2011，17（4）：495-497.

[15] 潘干华，李哲刚，申芫子，等.佛山市南海区育龄人群地中海贫血分子流行病学调查[J].中国计划生育学杂志，2011，19（2）：98-100.

[16] 陈红英，邹艳，刘春艳.α-地中海贫血基因诊断和血液学指标分析[J].中国优生与遗传杂志，2014（1）：21-22.

[17] 刘爱胜，陈荣贵，文艳.深圳宝安地区孕妇地中海贫血和g-6pd缺乏现状调查研究分析[J].临床和实验医学杂志，2011，10（18）：1432-1433.

[18] 杜丽，尹爱华，张彦，等.2171例地中海贫血产前基因诊断回顾性分析[J].国际妇产科学杂志，2012，39（2）：208-210.

[19] 刘冬霞，刘玉线，黄美琼，等.广东省清远地区地中海贫血基因分型情况分析[J].中国医药科学，2013，3（11）：93-95.

[20] 王晶晶，朱文彪，黄霜，等.广州市1381例育龄人群地中海贫血基因谱分析[J].中国优生与遗传杂志，2015（2）：5-7.

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