摘要：用单因素试验方法探讨超声波辅助提取芙蓉花中总黄酮的最佳提取条件，考察了提取温度、乙醇体积分数、提取时间、超声功率对提取结果的影响。结果表明，在提取温度6０ ℃，乙醇体积分数８０％，提取时间２０ ｍｉｎ，超声功率４００ Ｗ时，芙蓉花中总黄酮的提取率为２．９５％，提取效果最好，且优于回流提取法。
关键词：芙蓉花；总黄酮；提取；测定
中图分类号：Ｓ６８５．９９；R284.2 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）20－4248-02
Ultrasonic-assisted Extraction of Flavonoids from Flos Hibisci Mutabilis
ＣＨＥＮ Ｙａｏ，ＨＵＡＮＧ Ｙｕｎ－ｑｉｎｇ，ＹＩ Ｓｈｕ－ｊｕａｎ，ＹＵ Ｊｉｎｇ，ＺＨＵＯ Ｌｉ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Chemical Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｎｅｉｊｉａｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎｅｉｊｉａｎｇ ６４１１１２，Ｓｉｃｈｕａｎ， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｔｅｓｔｓ ｗｅｒｅ ａｄｏｐｔｅｄ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｉｄｓ ｆｒｏｍ ｆｌｏｗｅｒ ｏｆ Ｈｉｂｉｓｃｕｓ ｍｕｔａｂｉｌｉｓ （Ｆｌｏｓ Ｈｉｂｉｓｃｉ Ｍｕｔａｂｉｌｉｓ）． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｘｔａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ， ｔｉｍｅ， ｅｎｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｐｏｗｅｒ ｏｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｃｈｉｅｖｅｄ ｉｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ａｔ ８０ ℃ ｆｏｒ ２０ ｍｉｎ ｗｈｅｎ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ８０％； ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｐｏｗｅｒ ｗａｓ ４００ Ｗ． Ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅｓｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗａｓ ２．９５％； ａｎｄ ｉｔ ｗａｓ ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｔｏ ｔｈｅ ｈｅａｔｉｎｇ ｒｅｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｆｌｏｓ Ｈｉｂｉｓｃｉ Ｍｕｔａｂｉｌｉｓ； ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ； ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
芙蓉花为锦葵科（Ｍａｌｖａｃｅａｅ）植物木芙蓉（Ｈｉｂｉｓｃｕｓ ｍｕｔａｂｉｌｉｓ Ｌ．）的花，别名叫拒霜花，分布于四川、云南、山东等地。近年来研究证明，芙蓉的花、叶中含有芸香甙等黄酮类化合物［１，２］，因此芙蓉花可入药，主治肺热咳嗽、吐血、目赤肿痛等。但芙蓉花的药用成分分析尚未见报道。黄酮类化合物是一类重要的天然有机化合物，广泛存在于植物中，具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肝毒等多种生理活性，一直受到国内外的广泛重视，研究进展很快［３－６］。为进一步扩展芙蓉花的药用价值，对芙蓉花中总黄酮进行了提取与测定。
１材料与方法
１．１材料
芙蓉花：采摘于成都市区。
仪器：７２２Ｎ分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），ＫＱ－４００ＫＤＢ型高功率数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），ＡＥ２４０电子分析天平（瑞士梅特勒－托利多）。
试剂：无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠，均为分析纯；芦丁标准溶液（０．２ ｍｇ／ｍＬ）。
１．２方法
１．２．１样品溶液的制备将芙蓉花洗净后烘干，研磨成粉末后准确称取１．２５０ ０ ｇ粉末，加入乙醇溶液１０ ｍＬ，经提取，冷却，过滤，从滤液中移取０．７ ｍＬ于５０ ｍＬ容量瓶中用３０％（Ｖ／Ｖ，下同）的乙醇定容。
１．２．２标准曲线的绘制吸取芦丁标准溶液１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０ ｍＬ于２５ ｍＬ比色管中，各加入５０ ｍｇ／ｍＬ亚硝酸钠溶液１．０ ｍＬ、１００ ｍｇ／ｍＬ硝酸铝溶液各１．０ ｍＬ、４０ ｍｇ／ｍＬ氢氧化钠试液６．０ ｍＬ，用３０％的乙醇定容至刻度，摇匀，静置后，在５１０ ｎｍ波长处测定其吸光度［７－９］。以吸光度（Ａ）为纵坐标，浓度（Ｃ／／μｇ／ｍＬ）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为■＝０．０１１ ３Ｃ＋０．０１２ １，相关系数ｒ＝０．９９９ ２。
2结果与分析
2．１超声波辅助提取法单因素试验结果
2.1.1乙醇体积分数对芙蓉花中总黄酮提取率的影响准确称取１．２５０ ０ ｇ芙蓉花粉末５份，分别加入不同体积分数的乙醇溶液１０ ｍＬ，在提取温度５０ ℃、超声功率４００ Ｗ下提取３０ ｍｉｎ后，按前述方法测定吸光度，考察乙醇体积分数对芙蓉花中总黄酮提取率的影响，结果见表１。结果表明，总黄酮提取率随乙醇体积分数的增加而先增加，但增加到８０％后又随乙醇体积分数的增加而降低，因此选择８０％的乙醇溶液为浸提剂。
2.1.2提取温度对芙蓉花中总黄酮提取率的影响称取质量为１．２５０ ０ ｇ芙蓉花粉末５份，分别加入８０％（V/V，下同）的乙醇溶液１０ ｍＬ，分别在超声功率４００ Ｗ、不同提取温度下（３０、４０、５０、６０﹑７０ ℃）提取３０ ｍｉｎ后抽滤，滤液用３０％的乙醇定容至５０ ｍＬ。分别精密移取０．７ ｍＬ提取液于５０ ｍＬ比色管中，按前述方法测定吸光度，考察提取温度对芙蓉花中总黄酮提取率的影响，结果（表２）表明，总黄酮提取率随提取温度的增加而增加，但是在６０、７０ ℃之间增加已经不明显了，考虑到仪器损耗及仪器最大温度的限制等方面因素（仪器最高温度为７０ ℃），因此最佳提取温度为６０ ℃。
2.1.3超声功率对芙蓉花中总黄酮提取率的影响按前面的单因素试验方法，在提取温度５０ ℃，不同超声功率下提取３０ ｍｉｎ后抽滤，考察超声功率对芙蓉花中总黄酮提取率的影响，结果（表３）表明，随着超声功率的提高，提取率不断上升，试验中最佳超声功率为４００ Ｗ。
2.1.4提取时间对芙蓉花中总黄酮提取率的影响按前述方法，分别在提取温度５０ ℃、超声功率４００ Ｗ、不同提取时间下提取后抽滤，考察提取时间对芙蓉花中总黄酮提取率的影响。结果（表４）表明，随着提取时间的延长，提取率先上升后下降，在提取时间为２０ ｍｉｎ时提取率最大，因此最佳提取时间是２０ ｍｉｎ。
2.２单因素综合试验结果
按相同的试验方法，用８０％的乙醇，提取温度６０ ℃，提取时间２０ ｍｉｎ和超声功率４００ Ｗ提取，得到提取率为２．９５％。
2．３回流提取试验结果
称取１．２５０ ０ ｇ芙蓉花粉末，加入８０％的乙醇溶液１０ ｍＬ，常压下水浴加热至６０ ℃回流提取２０ ｍｉｎ后，测定吸光度，结果得到总黄酮提取率为２．８０％。而超声波辅助提取总黄酮的提取率为２．９５％，所以超声波辅助提取法提取效率更高。
2．４精密度试验结果
准确移取０．７ ｍＬ芙蓉花样品稀释液，连续测定５次吸光度，计算其变异系数。由数据得到其Ｓ为０．２９０ ０％，CV为０．７５％，说明该试验方法精密度较好。
2．５重复性试验结果
取芙蓉花粉末５份，按超声波辅助提取法制备样品溶液，测定吸光度，计算其变异系数得Ｓ为０．３６０ ４％，CV为０．９８％，说明其重复性较高。
2．６加标回收试验结果
移取芦丁标准溶液１．０、２．０ ｍＬ各两份于４个５０ ｍＬ比色管中，向加入了1.0 ｍＬ标准溶液的两个比色管中分别加入0.6~0.7 ｍＬ样品稀释液，同样于有2.0 ｍＬ标准溶液的两个比色管中分别加入0.6、0.7 ｍＬ样品稀释液，按试验方法操作。结果表明，芦丁回收率是１０２．３６％～１０８．４７％，平均回收率为１０５．８４％，CV为２．６６％，说明采用本方法对芙蓉花中总黄酮含量进行定量分析是可行的，结果稳定可靠。
3小结
通过超声波辅助提取法对芙蓉花中总黄酮进行提取，利用单因素条件法，考察了乙醇体积分数、提取温度、超声功率、提取时间对提取率的影响，从而得出：乙醇体积分数﹑提取温度﹑超声功率﹑提取时间均会对芙蓉花中总黄酮含量的提取有影响。其中最佳的试验条件为提取时间２０ ｍｉｎ，乙醇体积分数８０％，提取温度６０ ℃，超声功率４００ Ｗ。此条件下总黄酮提取率为２．９５％。
超声波辅助提取法与回流提取法相比较，超声波辅助提取法对芙蓉花中总黄酮的提取要优于回流提取法。
芙蓉花中总黄酮的提取结果与大豆总黄酮含量对比，大豆中总黄酮含量一般为０．２４％和０．２２％［１０］，或者更低，比芙蓉花中总黄酮含量低，所以芙蓉花中总黄酮具有潜在的开发价值。
参考文献：
［１］ 姚莉韵，陆阳，陈泽乃． 木芙蓉叶化学成分研究［Ｊ］． 中草药，2003，34（3）：201-203．
［２］ 陈仁通，陈玲． 木芙蓉中的化学成分［Ｊ］．中草药，１９９３，２４（５）：２２７-229．
［３］ 汤容，樊瑞霞． 大豆异黄酮抗癌作用的研究进展［Ｊ］． 中国药学杂志，１９９９，３４（７）：４３５-437．
［４］ 吴立军． 天然药物化学［Ｍ］． 北京：人民卫生出版社，２００４．
［５］ ＪＡＮＫＵＮ Ｊ，ＳＥＬＭＡＮ Ｓ Ｈ，ＳＷＩＥＲＥＺ Ｒ，ｅｔ ａｌ． Ｗｈｙ ｄｒｉｎｋｉｎｇ ｇｒｅｅｎ ｔｅａ ｃｏｕｌｄ ｐｒｅｖｅｎｔ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］． Ｎａｔｕｒｅ，１９９７，３８７（6633）：５６１．
［６］ 侯艳宁，朱秀媛，程桂芳． 黄芩苷的抗炎机理［Ｊ］． 药学学报，２０００，３５（３）：１６１-164．
［７］ 黄德娟，黄德超，陈毅峰． 水蕹菜总黄酮含量的测定［Ｊ］． 食品科技，２００８，３３（１１）：２１９－２２１．
［８］ 毕和平，韩长日，张连华，等． 海南木莲总黄酮含量的测定［Ｊ］． 自然科学，２００５，１８（４）：３４８－３５０．
［９］ 陈登丰，李烈辉，罗茂玉． 正交设计法优选银杏叶黄酮类化合物提取工艺的研究［Ｊ］． 制剂与技术，２０１０，１７（１６）：１３４－１３５．
［１０］ 魏福华，张永忠，井乐刚，等． 紫外分光光度法测定大豆中大豆异黄酮［Ｊ］．理化检验－化学分册，２００６，42（6）：４６１－４６３．