工作。为此，研究人员开发了温控性质粒。其原理是将Red /Red 与 基因放在含有PL启动子和cI857基因的载体上，然后导入大肠杆菌中表达。在温度为30℃时，cI857基因启动PL启动子，使Red系统不表达。当温度为42℃时，cI857基因的作用被抑制，Red系统得以重新表达。
（2）由于工程用大肠杆菌一般都缺乏RecA蛋白，在这样的情况下重组的发生率会降低。在最初的目的中使RecA缺失，其目的是让真个表达系统中外源DNA复制更稳定。但是为了避免RecA缺失对重组率的影响又从新引入了RecA蛋白。
（3） 基因在表达的过程中不易控制，它的过度表达会影响RecBCD的活性，进而影响质粒表达的稳定性（Gam蛋白与RecBCD蛋白结合只是抑制了RecBCD对核酸的降解能力，但仍然能对同源重组起促进作用）。为了解决这样的问题，研究者将 基因和Red/ET系统共表达，从而对 基因进行调控。
此外，有研究发现， 基因上的5′端的非翻译区域对重组效率有很大的影响。将含有5′端的非翻译区突变的基因与Red 和Red 连接，可以很大程度的提高重组效率。
5在载体构建中的应用
2006年Osterrieder等運用Red/ET系统和反筛选系统（I-SceI蛋白）设计出了两步重组方法。首先设计一个含有I-SceI同源臂的基因片段，通过Red/ET系统转入载体之中。构建好的重组载体通过诱导I-SceI蛋白的表达，使双链产生切口。切口处可作为同源臂，进行下一次的异源重组。这种两步重组系统大大地提高了重组的精确性。
在对致病菌基因的研究中，朱善元等对禽致病大肠杆菌的ibeA基因进行缺失，用缺失该基因的大肠杆菌粘附与侵袭人微血管内皮细胞。结果显示，缺失ibeA基因的大肠杆菌与微血管内皮细胞的粘附能力显著下降，侵袭率也显著下降。Murphy等还通过该技术对致病大肠杆菌的有毒基因进行敲除，以为免疫制剂的进一步研究提供理论方法。
兰德松等，利用Red/ET同源重组技术，通过两步重组法构建了禽流感A/Goose/Guangdong/3/96（H5N1）毒株的血凝素（HA）基因的重组火鸡疱疹病毒。他们的研究为新型禽流感重载活性疫苗的开发奠定了基础。
6展望
Red/ET同源重组技术的使用，为外源基基因的重组表达提供了一种快捷、简单的方法。在抗生素的开发中，使抗生素异源表达，提高产量也是研究中的重点。该技术除了能方便的运用于抗生素的异源表达方面，还可以通过对基因簇的修饰、重排、删除等来创造新的抗生素。现在已有该方面的研究。
参考文献
[1] 马先勇，姚开泰.同源重组技术研究进展[J].生物工程进展，1996，16（3）：16-23.
[2] 王军平， 张友明. Red/ET重组及其在生物医学中的应用[J].生物工程学报，2000，18（12）：502-506.