摘要：在水温为29.0±1.0℃条件下，将体质量为6～7g的七彩神仙鱼（Symphysodon aequifasciata）放入54cm×40cm×28cm 的水箱中，投喂以鱼粉和豆粕为蛋白源（粗蛋白45.0%）、以花生油（PO）、芝麻油（ZO）、豆油（SO）、深海鱼油（FO）为脂肪源（添加5.0%，粗脂肪16.0%），相互搭配使亚油酸和亚麻酸含量为0.55%（1.0%SO+4.0%FO）、1.61%（5.0%PO）、1.98%（1.31%PO+3.69%ZO）、2.36%（3.04%Z0+1.96%SO）和2.74%（5.0%SO）的5种饲料,每种饲料3个重复。60d的饲养期间，七彩神仙鱼幼鱼的成活率变化在83.33%～100.0%之间，各组间差异不显著（P>0.05）。但摄食添加豆油饲料鱼的特殊生长率（SGR）最高，显著高于其它组（P<0.05）,摄食添加鱼油饲料的鱼最低。摄食含豆油和芝麻油与豆油混合饲料的鱼饲料效率（FER）最高，显著高于其它组（（P<0.05）），摄食鱼油为主、单一花生油和花生油与芝麻油混合饲料的鱼最低。摄食3种植物油混合饲料的鱼的蛋白效率最高，显著高于其它组（P < 0.05），摄食单一花生油饲料的鱼最低。鱼体蛋白含量（y）与亚油酸和亚麻酸含量（x）的二次曲线方程为： ，即亚油酸+亚麻酸含量占饲料干物质2.36%～2.74%时，生长较快，饲料转化效率较高。
关键词：七彩神仙鱼；生长；消化率; 蛋白质效率；饲料效率；脂肪酸
七彩神仙鱼（Symphysodon aequifasciata）原产于南美洲亚马逊河，有“热带鱼之王”的美称，是我国广泛养殖的观赏鱼之一。关于七彩神仙鱼的繁殖、水质、对蛋白质的需要及不同发育阶段蛋白酶活性等已有研究和报道。但有关七彩神仙鱼对脂肪和脂肪酸的需要，目前尚未见报道，饲养中主要是用鲜冻的“牛心汉堡”。这种饲料操作烦琐，成本高，易败坏水质而使鱼患病。
脂肪不仅供给鱼类生长和发育所必需的能量和结构物质（如细胞膜上的脂肪酸），还是脂溶性维生素（A、D、E等）的溶解介质和某些酶的辅助因子（影响骨骼等的代谢等）。鱼类对脂肪的需要实质是对脂肪酸的需要。一般认为，罗非鱼的必需脂肪酸有4种：即亚油酸（18：2n-6）、亚麻酸（18：3n-3）、二十碳五烯酸（20：5n-3）（EPA）和二十二碳六烯酸（22：6n-3）（DHA），但不同鱼类对这四种必需脂肪酸的需要量和比例却有所不同。因此，研究饲料中不同脂肪源（即脂肪酸）对七彩神仙鱼生长和存活的影响，对科学配制饲料，提高七彩神仙鱼养殖的效益，丰富鱼类营养与饲料的研究具有重要意义。为此，我们于2006年6～9月采用脂肪酸梯度法，参照与七彩神仙鱼同科的罗非鱼的营养需求，研究了饲料中不同脂肪源对七彩神仙鱼幼鱼生长和存活的影响，以确定七彩神仙鱼幼鱼饲料中适宜的脂肪酸含量和种类。
1材料和方法
1.1实验饲料
以鱼粉为蛋白源（含粗蛋白45.0%）、以芝麻油、花生油、豆油和深海鱼油为脂肪源（添加5.0%），调节这几种油脂的比例制备了亚油酸和亚麻酸水平为0.5478%，1.61%、1.98%、
2.36%和2.74%的五种饲料（表1）。饲料原料粉碎后用绞肉机制成粒径为2.0mm的颗粒，阴干，低温保存备用。投喂前将饲料压碎，过60目筛卷，除去粉末后投喂。
注：① 从俄罗斯进口；②，③ 购自抚顺市丰顺饲料有限公司；总能量依蛋白质、脂肪和碳水化合物的平均热值（MJ﹒kg-1）分别为23.4、39.2、17.2计算，下同。
1.2实验鱼
实验鱼系本实验室购自大连市香炉礁花鸟鱼市场的种鱼自行繁殖的幼鱼，经严格挑选，选择健康活泼，大小基本一致的幼鱼，经过1个月的驯化，随机放入15个54cm×40cm×28cm的塑料箱中，每箱放鱼10尾。15个箱分成5组，每组投喂一种饲料，每组设3个平行，各水箱容水约20L。鱼空腹1d后活体称重、测体长，开始试验。
1.3饲养条件和管理方法
水源为曝气的自来水，pH 为7.5左右；实验期间用控温加热器使水温保持在29.0±1.0℃；连续24h充气，溶解氧保持在10.0mg.L-1以上；氨氮含量在0.08～2.95mg.L-1之间。
每天8：00、12：00和17：00各投喂一次，投饲量为鱼体重的3%～5%，每天吸粪便、残饵3次，每次换水量约20%。定时用虹吸法除污、换水，每30d称一次体重，计算鱼体生长，调整投饲量。
1.4测定项目
1.4.1营养成分和生长
实验期间收集粪便，实验结束时称量每组中全部鱼的体质量，测量体长，并从每组随机取鱼15尾，取混合肌肉约50g，分析鱼体组成。特殊增重率 （SGR）、蛋白质效率（PER）、饲料效率 （FER）和增长率按下式计算：
SGR=（lnWt-lnW0）/t×100%；
PER=（Wt-W0）/Ip×100%；
FER=（Wt-Wo）/If×100%；
增长率=（Lt-L0）/L0×100%
其中，Wt和W0分别为实验开始和结束时鱼的平均体质量；Lt和L0分别为实验结束和开始时鱼的平均体长；Ip为同一实验组中平均每尾鱼所摄入的蛋白质量；If为同一实验组平均每尾鱼所摄入的饲料干重，t为饲养天数。
采用凯氏定氮法、索氏抽提法、GB/T 5009.10—1985法和550℃灼烧法测定粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维和粗灰分；在105℃下烘至恒重以测定水分。
1.4.2胃和肠中消化酶的活性
蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性分别采用福林-酚法、淀粉-碘比色法和牛奶-NaOH滴定法测定。蛋白酶活力单位=（A÷15）×F；淀粉酶活力单位=（对照管光密度-测定管光密度）÷对照管光密度×800；脂肪酶活力单位=（C-D）×10×f/t。
其中，A为测得的样品光密度查曲线所得相应氨基酸微克数，F为酶液最终稀释倍数；C为样品耗碱量（ml），D为对照组耗碱量（ml），f为稀释倍数，t为作用时间。（F和f为不同实验方法的稀释倍数）。
脂肪酶的活性单位定义：在37℃下，每mg酶蛋白每min消耗的NaOH毫克分子数，单位为unit/（min.mg）。蛋白酶的活性单位定义：在37℃下每分钟水解酪蛋白产生1μg酪氨酸为1个酶活性单位（U）。淀粉酶活性单位定义：在37℃、30min内，100ml酶液中的淀粉酶能完全水解淀粉10㎎称为一个酶活力单位。
1.4.3饲料成分的消化率
消化率采用三氧化二铬（Cr2O3）指示剂法测定。Cr2O3的含量用湿式灰化定量法测定。消化率=[1-（E/e1×B/B1）]×100%；式中E和e1为饲料和粪便中营养物质的含量，B和B1为饲料和粪便中Cr2O3的含量。
1.5数据统计方法
实验数据用软件SPSS10.0和OriginPro75进行相关性检验、方差分析，若达到显著差异，则进行LSD多重比较。以P<0.01为差异极显著，P<0.05为差异显著。
2结果
2.1饲料中亚油酸和亚麻酸含量对七彩神仙鱼生长和饲料利用率的影响
60d的饲养期间，七彩神仙鱼幼鱼的成活率变化在83.33%～100.0%之间，各组间差异不显著（P>0.05），表明本实验饲料的脂肪酸源搭配，对七彩神仙鱼幼鱼的成活率无显著影响，但对生长和饲料利用率却有显著影响（表2）。摄食含不同脂肪源饲料的鱼的特殊生长率（SGR）由高至低依次为：F4> F3、F2> F5、F1，摄食含豆油饲料的鱼最高，显著高于其它组（P<0.05），摄食鱼油为主饲料的鱼最低。七彩神仙鱼幼鱼摄食含不同脂肪源饲料时，饲料效率（FER）由高至低依次为：F4、F3 > F5、F1、F2，摄食含豆油和芝麻油与豆油混合饲料的鱼最高，显著高于其它组（P<0.05），摄食鱼油为主、单一花生油和花生油与芝麻油混合饲料的鱼最低。摄食含不同脂肪源饲料的鱼的蛋白效率由高至低依次为： F3、F2> F5、F4、F1，摄食3种植物油混合饲料的鱼最高，显著高于其它组（P<0.05），摄食单一花生油饲料的鱼最低。实验结果表明，七彩神仙鱼幼鱼摄食含豆油及其与芝麻油混合的饲料时，即亚油酸+亚麻酸占饲料干物质2.36%～2.74%时，生长较快，饲料转化效率较高。
2.2饲料中不同脂肪源对鱼体组分的影响
七彩神仙鱼摄食含不同脂肪源组合的饲料时，肌肉中水分和灰分含量差异不显著（表3）（p>0.05）。但摄食含鱼油饲料的鱼肌肉中脂肪含量最低，显著低于其它鱼（P<0.05），其它各组鱼之间差异不显著（P>0.05）。鱼摄食芝麻油和豆油混合的饲料时，肌肉中蛋白质含量最高，显著高于其它鱼（P<0.05），其它各组鱼类之间差异不显著（P>0.05）。与生长和饲料利用率相同，七彩神仙鱼幼鱼摄食含豆油及其与芝麻油混合的饲料时，肌肉中脂肪和蛋白质含量最高。
2.3七彩神仙鱼幼鱼对不同脂肪源饲料中各种成分的表观消化率
七彩神仙鱼摄食含不同脂肪源的饲料时，对饲料中干物质和蛋白质的消化率差异不显著（p>0.05）（表4）。七彩神仙鱼幼鱼摄食含豆油及其与芝麻油混合的饲料时，即亚油酸+亚麻酸占饲料干物质2.36%～2.74%时，对饲料中脂
肪和蛋白质的消化率最高，其中对饲料中脂肪的消化率显著高于其他组 （P<0.05）。
2.4七彩神仙幼鱼摄食含不同脂肪源饲料时胃肠中消化酶的活性
七彩神仙幼鱼摄食含芝麻油与豆油混合的饲料时，胃蛋白酶活性最高，显著高于其它组（P<0.05）（表5）。七彩神仙幼鱼摄食含花生油与芝麻油混合饲料时，胃脂肪酶活性最高，显著高于其它组（P<0.05）。胃淀粉酶的活性则是摄食含花生油饲料的鱼最高，显著高于其它组（P<0.05）。与胃中消化酶的活性不同，肠脂肪酶和淀粉酶的活性均是摄食含鱼油为主要脂类时最高，显著高于其他鱼（P<0.05）。
3讨论
大量研究表明，多数淡水鱼类体内具有C20延长酶和Δ5-去饱和酶，能将18：n-3系列脂肪酸延长为n-3系列高度不饱和脂肪酸，所以，亚麻酸和亚油酸是淡水鱼类的必需脂肪酸。多数海水鱼类缺少C20延长酶和Δ5-去饱和酶，必需n-3系列高度不饱和脂肪酸，主要是22：6n-3（DHA）、20：5n-3（EPA）和20：4n-6（AA）。虽然Lee等（2003）认为星斑川鲽（Platichys stellatus）具有延长酶，可将亚麻酸和亚油酸延长为20：2n-6和20：3n-3，却没有去饱和酶，不能合成n-3或n-6系列长链高度不饱和脂肪酸。军曹鱼（Rachycentron canadum）、牙鲆（Paralichthys olivacus）、大菱鲆（Scophthalmus maximus）、金头鲷（Sparus auratus）和黄带鯵（Longirostris delicatissimus）等海水鱼类饲料中n-3系列高度不饱和脂肪酸的适宜添加量变化在1.2%～1.7%之间。有关鱼类对饲料中亚油酸和亚麻酸需要量的研究不多。本实验中，亚油酸+亚麻酸占饲料干物质的2.36%～2.74%时，七彩神仙鱼生长较快，饲料转化效率较高。亚油酸和亚麻酸与DHA和EPA的碳原子之比为1：0.8，若亚油酸和亚麻酸全部转化为DHA与EPA，按海水鱼饲料中n-3系列高度不饱和脂肪酸的适宜添加量计，则饲料中亚油酸和亚麻酸的适宜需要量为1.5%～2.1%；若按亚油酸和亚麻酸到DHA与EPA的转化率为80%计，则为1.8%～2.5%，与本实验结果相近。由此我们推测，七彩神仙鱼对饲料中亚油酸和亚麻酸的滞留和转化率在80%左右。
n-3系列高度不饱和脂肪酸之间的代谢竞争要求鱼类饲料中DHA、EPA和AA不仅应保持适宜的数量，还应保持适宜的比例。海鲈稚鱼饲料中适宜的DHA与EPA之比为2：1；EPA与AA之比为1：1。鲆鲽类的DHA与EPA比与海鲈相似，而EPA与AA之比则为10以上。鱼油富含n-3高度不饱和脂肪酸，豆油富含亚油酸和亚麻酸，而花生油和芝麻油则富含亚油酸而缺乏亚麻酸。这可能是本实验中添加花生油和芝麻油的饲料效果不及添加豆油的饲料效果好的原因之一。这说明七彩神仙鱼不仅需要亚油酸和亚麻酸，而且二者还应保持适宜的比例。关于亚油酸和亚麻酸的适宜比例仍需深入研究。本实验中，七彩神仙鱼未出现明显的高度不饱和脂肪酸缺乏症，表明本试验饲料，尤其是含2.4%～2.7%亚油酸和亚麻酸的饲料，能取代常用的鲜冻的“牛心汉堡”。
许多研究认为，在饲料中添加鱼油与豆油的混合油脂或大豆卵磷脂作脂肪源饲养海水和洄游鱼类效果较好。这与本实验中七彩神仙鱼摄食添加鱼油与豆油混合油脂时，生长不快的结果不一致。我们认为，原因可能有二：一是本实验采用的鱼粉中残留的油脂含量高，不再添加鱼油就能满足鱼类对n-3系列高度不饱和脂肪酸的需要，未添加鱼油组鱼类生长较快就是个例证。再添加鱼油使饲料中必需脂肪酸的数量和比例失调，导致鱼生长缓慢。二是七彩神仙鱼摄食过量脂类受到了脂类静力机制（lipostatic mechanism）的调控，即血液循环因子—莱普亭（leptin）或肠泄素（enterostatin）等引起的体脂负反馈。莱普亭是由肠脂肪细胞合成和分泌的由146个氨基酸组成的细胞因子肽，其分泌量与体内贮存脂的数量成比例，通过负反馈来抑制食欲，调节能量平衡。