摘要：目的 通过实验，对双黄连中金银花和连翘水提液醇沉工艺及干燥工艺进行研究，优选出最佳精制方法和干燥条件。方法 黄芩的提取精制方法按照药典方法进行，本实验考察比较金银花和连翘提取液一次醇沉和二次醇沉后所测得的浸膏得量和有效成分的含量，从而确定最优的提取精制工艺。在此基础上，对减压干燥法和微波干燥法进行了比较，优选出最佳干燥条件。结果 通过两种方法的比较显示：二次醇沉的提取精制方法出膏率更低且含量高；微波干燥大大减少了干燥时间。结论 优选所得醇沉工艺和干燥工艺科学合理。
关键词：双黄连，水提醇沉，干燥工艺
双黄连是治疗感冒的常用药物，它是由金银花、黄芩、连翘组成。由银翘散（《温病条辨》）精简而得。金银花有清热解毒的作用，用于温病初起的解表、清热、解毒、止痢；黄芩为常用清热燥湿、解毒、凉血、泻肺火药；连翘有清心、肺、胃之热，散温邪、解 毒疮等作用。三药共奏清热解毒、利尿凉血之功效。因此可用于风热感冒所致的发热、 咳嗽、咽痛[1]。本实验主要是指药典双黄连片的基础上对其金银花和连翘水提液醇沉工艺及干燥工艺进行改进，减少服用量，为双黄连新型制剂的研究打基础。
1 仪器与试药
1.1仪器 微波真空干燥机（WBZ-2型，贵阳新奇微波工业有限责任公司）；十万分之一电子天平（AE/240型，上海梅特勒仪器有限公司）；千分之一电子天平（JA2003型，上海良平仪器仪表有限公司）；高效液相色谱仪（检测器：Waters 2487，泵：515 HPLC PUMP）。
1.2试药 绿原酸对照品（批号：110753-201314，中国药品生物制品检定所），黄芩苷对照品（批号：110715-201016，中国药品生物制品检定所），色谱乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为娃哈哈纯净水。
黄芩饮片（批号：130401，北京同仁堂）、金银花饮品（批号：130101，阜安堂药房）、连翘饮品（批号：30901，阜安堂药房），按照《中国药典》2010版一部，对其进行含量测定，黄芩、金银花、连翘均符合药典标准。
2 方法与结果
2.1色谱条件 绿原酸以甲醇-1%冰醋酸水溶液（50：50）为流动相，检测波长为274nm，流速1.0mL·min-1，进样量10μL，色谱柱为DIKMA（250mm×4.6mm，5μm，产品系列号：8136519），柱温为25℃。
2.2对照品溶液的制备 精密称取精密称取绿原酸对照品4.07mg，置10mL棕色容量瓶中，用50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.407mg·mL-1的绿原酸对照品母溶液。
2.3供试品溶液的制备
2.3.1连翘、金银花供试品的制备[2-4] 称取1d处方量的金银花和连翘，即金银花22.5g，连翘45.0g，加温水适量浸30min，煎煮2次，1h/次，合并水煮液，滤过，并浓缩至（80℃）比重为1.20～1.25，浓缩液冷却至40℃加95%乙醇至溶液含醇量为85%，充分搅拌，静置12h。取上清液，残渣加85%乙醇适量，搅拌，静置12h。滤过，合并2次滤液并浓缩至（80℃）比重为1.20～1.25，浓缩液加95%乙醇至含醇量为75%，充分搅拌，静置12h。滤过，滤液浓缩成相对密度为1.34～1.40（60℃）的稠膏，微波干燥，得金银花、连翘提取物的干浸膏。精密称取干浸膏适量至10mL棕色容量瓶中，加适量50%甲醇超声处理溶解，再用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3.2阴性供试品的制备 处方除去金银花后按"2.3.1"项下制备，即得阴性供试品。
2.3.3空白对照的制备 配置50%甲醇溶液，并用0.45μm微孔滤膜过滤，即得空白对照品溶液。
2.4方法学考察
2.4.1线性关系的考察 精密吸取绿原酸对照品，配置浓度3.256、4.070、4.884、5.698、6.512μg·mL-1吸取上述溶液10μL，注入高效液相色谱仪，按"2.1"项下色谱测定条件测定峰面积，以对照品的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，线性回归，结果表明黄芩苷在3.256～6.512μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性。
2.4.2精密度实验精密吸取绿原酸10μL，分别按照"2.1"项下色谱条件连续进样6次，以峰面积计算RSD值，黄芩苷RSD为2.22%，绿原酸RSD为2.43%，表明仪器的精密度良好。
2.4.3稳定性实验 分别精密吸取"2.3"项下制备成的供试品溶液，按照"2.1"项下的色谱条件在0h、1h、3h、6h、9h、12h进样，测得峰面积，12h内黄芩苷和绿原酸峰面积的RSD值分别为2.03%，2.62%，表明供试品溶液至少在12h内含量稳定。
2.4.4重复性实验 称取金银花饮品2.25g、连翘饮品4.50g，精密称定。按"2.3"项下供试品溶液制备方法制备6份，按照"2.1"项下的色谱条件进样，以峰面积计算RSD值黄芩苷为2.67%、绿原酸为1.62%，结果表明重复性良好。
2.4.5加样回收率实验精密称取已测定绿原酸含量的同批样品6份各约0.00012g，分别加50%甲醇定容至10mL，再精密吸取2.50mL，分别精密加入绿原酸对照品溶液（40.7μg·mL-1）0.80mL，加50%甲醇定容至10mL后，混匀，按"2.1"项下的色谱条件测定，依次进样10μL，测定峰面积，计算出回收率1010.1%，RSD值为1.91。
2.4.6阴性对照实验 取阴性供试品溶液、空白对照溶液和对照品溶液，分别按照"2.1"项下色谱条件进行进样，结果阴性供试品溶液和空白对照溶液在45.10min附近都无峰，说明有效成分的测定无干扰。
通过以上方法学考察的试验结果说明，黄芩浸膏中黄芩苷及连翘、金银花浸膏中绿原酸的含量测定方法可行。
3 连翘、金银花提取精制及干燥工艺的考察
3.1一次醇沉、二次醇沉的考察
3.1.1一次醇沉的考察 称取1d处方量的金银花和连翘，即金银花22.5g，连翘45.0g，平行制备3份。加温水适量浸30min，煎煮2次，1h/次，合并水煮液，滤过，并浓缩至（80℃）比重为1.20～1.25，浓缩液冷却至40℃加95%乙醇至溶液含醇量为85%，充分搅拌，静置12h。取上清液，残渣加85%乙醇适量，搅拌，静置12h。滤过，合并2次滤液并浓缩至相对密度为1.34～1.40（60℃）的稠膏，减压干燥，即得一次醇沉金银花、连翘提取物。得干浸膏10.13g，按"2.1"项下色谱条件进样测定，绿原酸平均含量为1.96%。见表1。
3.1.2二次醇沉的考察 称取一日处方量的金银花和连翘，及金银花22.5g，连翘45.0g，平行制备3份。加温水适量浸30min，煎煮2次，1h/次，合并水煮液，滤过，并浓缩至（80℃）比重为1.20～1.25，浓缩液冷却至40℃加95%乙醇至溶液含醇量为85%，充分搅拌，静置12h。取上清液，残渣加85%乙醇适量，搅拌，静置12h。滤过，合并2次滤液并浓缩至（80℃）比重为1.20～1.25，浓缩液加95%乙醇至含醇量为75%，充分搅拌，静置12h。滤过，滤液浓缩成相对密度为1.34～1.40（60℃）的稠膏，减压干燥，即得二次醇沉金银花、连翘提取物。得干浸膏3.35g，按"2.1"项下的色谱条件进样测定，得绿原酸含量3.9%。见表2。
3.1.3结果分析 由以上结果可知：二次醇沉平均得到绿原酸的干浸膏量3.35g，且平均含量达到3.9%，而一次醇沉平均得到干浸膏量10.13g，平均含量只有1.96%。两个结果表明二次醇沉的浸膏量大大减少，而有效成分的含量没有显著降低，因此我们选择用二次醇沉来精制连翘、金银花提取物。
3.2干燥工艺的考察
3.2.1减压真空干燥 按照"3.1.2"的提取精制方法，平行制备3份提取物，将所得的稠膏放入温度为80℃，压力为-0.06MPa的真空干燥箱中，见表3。
3.2.2微波真空干燥 按照"3.1.2"的提取精制方法，平行制备3份提取物，将所得的稠膏放入微波真空干燥机中，温度控制在30℃内，压力为-0.08MPa，见表4。
4 结论
数据表明，虽然两种干燥方法所得的干浸膏量相差不大，但微波真空干燥大大节省了时间，而且指标性成分（绿原酸）含量也相对减压真空干燥高，所以选择用微波真空干燥来干燥连翘、金银花提取物。
5 工艺验证实验
采用"3.1.2"项下制备连翘、金银花稠浸膏三份，采用"3.2.2"项下微波提取条件进行提取，制备三批干浸膏样品，记录浸膏得量，并按"2.1"项下的色谱条件，测定绿原酸的含量，结果显示，浸膏得量平均值为3.33g，黄芩苷含量平均值为4.0%，结果证明该工艺稳定可行。
6 讨论
6.1双黄连主要由三味药组成，药味虽不多，但按药典中的提取纯化制备出的金银花与连翘的浸膏量大，达不到新剂型研制的要求。本实验在药典一次醇沉的基础上进行二次醇沉，以减少浸膏量。结果表明二次醇沉后出膏量为3.35g，与一次醇沉10.13g相比大大的减少了出膏量，而在二次醇沉的过程中绿原酸的含量并没有损失。因此证明了二次醇沉的可行性。
6.2在此基础上，干燥工艺也是一个考察要点，传统的减压干燥法干燥时间过长，会影响到浸膏有效成分的含量。因此，我们考察了减压干燥与微波干燥两种工艺，微波工艺大大降低了干燥时间，并且含量更高，证明了微波干燥方法可行。
参考文献：
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[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：159-160.
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[4]张文清，夏伟，等.双黄连的提取精制工艺研究[J].世界科学技术-中医药现代化，2008，10（3）：66-70.
编辑/哈涛