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[摘要] 目的 建立测定安儿宁颗粒中岩白菜素含量的HPLC法。 方法 采用Boston C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱温为25℃，以甲醇-水（17∶83，V/V）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为275 nm，进样量为10 μL。 结果 在10.1～101.0 μg/mL浓度范围内，岩白菜素的色谱峰峰面积与对照品浓度线性关系良好（r = 0.999 8，n = 5），平均加样回收率分别为98.85%，RSD为1.37%（n = 6）。 结论 所建立的含量测定方法简便易行、准确度高、重现性好，可用于安儿宁颗粒中岩白菜素的质量控制。
[关键词] 岩白菜素；安儿宁颗粒；HPLC；含量测定
[中图分类号] R286 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2012）10（c）-0066-03
安儿宁颗粒由天竺黄、短管兔耳草、岩白菜、高山辣根菜等九味药材组方而成，具有清热祛风、化痰止咳的功效，主要用于小儿风热感冒、咳嗽有痰、发热咽痛、上呼吸道感染见上述症候者[1]。方中君药岩白菜为民间常用药，最早记载于清《分类草药性》，具有滋补、止血、止咳等功效[2-3]。岩白菜素为岩白菜主要药效成分，具有收敛止泻、止血止咳、舒筋活络的功效，生理活性显著，为镇咳祛痰药之良药，多用于民族药中肺系统疾病及消化道系统疾病的治疗[4-6]，因此选取岩白菜素作为安儿宁颗粒含量测定指标。文献报道岩白菜素的含量测定方法主要有紫外分光光度法[7-8]、薄层扫描法[9-10]和高效液相色谱法[11-13]。本实验采用高效液相色谱法（HPLC）对安儿宁颗粒中岩白菜素进行了含量测定，并对其进行了方法学研究。本文首次建立了安儿宁颗粒中岩白菜素的含量测定方法，该方法简便易行，专属性强，稳定性、重复性较好，精密度、回收率也较高，因此能够作为安儿宁颗粒中岩白菜素的质量控制方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器
1220型安捷伦高效液相色谱仪；Boston C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；BT125D赛多利斯电子分析天平，KQ-300B超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2 试药
岩白菜素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用），批号：111532-200202；安儿宁颗粒（青海金诃藏药药业股份有限公司），批号分别为20091005、20091110、20091227，规格：3 g/袋；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 试验方法与结果
2.1 液相色谱条件
色谱柱：Boston C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱温：25℃，流动相：甲醇-水（17∶83，V/V），流速：1.0 mL/min，检测波长：275 nm，进样量：10 μL。理论板数按岩白菜素峰计算应不低于2 000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取岩白菜素对照品12.62 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀；精密量取10 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得（岩白菜素含量为50.48 μg/mL）。
2.2.2 供试品溶液的制备 本品研细后，取粉末2 g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方量以相同制剂工艺制备缺少岩白菜药材的阴性对照样品，照“2.2.2”项下的供试品溶液的制备方法同法制得阴性样品溶液。
2.3 方法学考察
2.3.1 系统适用性考察与阴性干扰试验 照“2.1”项所述的液相色谱条件进行测定，精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各5 μL，分别注入液相色谱仪。试验结果：供试品色谱中，在与对照品溶液色谱峰相应的位置上检出相应的色谱峰，且岩白菜素色谱峰与相邻色谱峰的分离度均大于1.5；阴性对照溶液在与对照品溶液色谱峰相应的位置上没有相应的色谱峰，表明阴性样品对供试品的测定没有干扰。结果见图1。
2.3.2 线性关系考察 精密量取岩白菜素对照品溶液（101.0 μg/mL）1、3、5、8、10 mL，分别置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，分别精密进样10 μL注入高效液相色谱仪，照“2.1”项所述的液相色谱条件进行测定。以对照品浓度（C）为横坐标，色谱峰峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线。试验结果：岩白菜素回归方程为A = 6.080 7C+0.480 8，相关系数：R = 0.999 8。结果表明：岩白菜素在10.1～101.0 μg/mL浓度范围内，岩白菜素色谱峰的峰面积（A）与对照品浓度（C）线性关系良好。
2.3.3 精密度试验 照“2.1”项所述的液相色谱条件进行测定，精密吸取同一对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，连续测定6次，记录岩白菜素色谱峰的峰面积并计算相对标准偏差。试验结果：岩白菜素对照品色谱峰峰面积的平均值为310.3，RSD = 0.53%（n = 6）。结果表明：该方法仪器的精密度良好。
2.3.4 稳定性试验 按照“2.2.2”项所述的方法制备供试品溶液，精密吸取同一供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，照“2.1”项所述的液相色谱条件进行测定，以后每隔2 h测定1次，考察8 h，记录岩白菜素色谱峰的峰面积并计算相对标准偏差。试验结果：供试品溶液中岩白菜素色谱峰峰面积的平均值为324.2，RSD = 0.90%（n = 5）。结果表明：供试品溶液中岩白菜素在8 h内保持稳定。
2.3.5 重复性试验 取同一批安儿宁颗粒样品（批号为20091227）6份，按照“2.2.2”项所述的方法制备供试品溶液，照“2.1”项所述的液相色谱条件进行测定，分别精密吸取对照品溶液5、10 μL，供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法方程计算含量。试验结果：供试品溶液中岩白菜素含量的平均值为3.954 mg/袋，RSD为1.15%（n = 6）。结果表明：该分析方法重复性较好。
2.3.6 加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批安儿宁颗粒样品（批号为20091227，样品中岩白菜素的含量为3.954 mg/袋）1 g，共6份，分别置具塞的锥形瓶中，各精密加入对照品溶液（岩白菜素含量为50.48 μg/mL）25 mL和25 mL甲醇，按“2.2.2”项所述的方法制备供试品溶液，按“2.1”项所述的液相色谱条件进行测定，分别精密吸取对照品溶液5、10 μL，供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法方程计算含量，并计算回收率。试验结果：供试品中岩白菜素平均加样回收率为98.85%，RSD为1.37% （n = 6）。结果表明：该测定方法测定结果准确。结果见表1。
2.3.7 样品含量测定 按照“2.2.2”项所述的方法制备批号分别为20091005、20091110、20091227的三批安儿宁颗粒供试品溶液（每批3份）。按“2.1”项所述的液相色谱条件进行含量测定，分别精密吸取对照品溶液5、10 μL，供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法方程分别计算供试品中岩白菜素的含量。结果见表2。
3 讨论
3.1 测定波长的选择
取岩白菜素对照品溶液，置紫外分光光度计于190～400 nm波长范围内进行扫描，记录紫外吸收光谱图。结果显示岩白菜素对照品溶液在220 nm和275 nm有最大吸收峰，分别以220 nm和275 nm作为检测波长进行考察，结果表明275 nm波长下供试品色谱图中基线平稳，杂质峰较少，分离度效果好。文献报道岩白菜素含量测定也多采用275 nm[12-16]，因此选定275 nm为检测波长。
3.2 流动相的选择
参照相关文献对流动相进行考察，发现不需加入酸液或缓冲液即可获得良好的色谱峰，文献多采用甲醇-水系统[12-16]，因此选择了甲醇-水系统为流动相。分别考察了甲醇-水（20∶80，V/V）、甲醇-水（17∶83，V/V）、甲醇-水（15∶85，V/V）流动相条件下，供试品溶液中岩白菜素色谱峰的分离效果。结果表明，甲醇-水（15∶85，V/V）流动相条件下，岩白菜素峰保留时间较长；甲醇-水（20∶80，V/V）流动相条件下，岩白菜素峰形不好；甲醇-水（17∶83，V/V）流动相条件下，岩白菜素保留时间约15 min，峰形较好，岩白菜素色谱峰与相邻色谱峰的分离度均大于1.5。因此选用甲醇-水（17∶83，V/V）为本实验的流动相。
3.3 供试品处理方法的考察
考察了超声提取、回流提取、振揺提取3种提取方法，岩白菜素的提取效果，结果超声提取所得供试品溶液中岩白菜素含量明显高于回流提取和振揺提取，故选用提取方法为超声提取；考察了超声时间分别为20、30、40 min时，岩白菜素的提取效果，结果20 min提取不完全，30、40 min提取所得供试品溶液中岩白菜素含量无明显差别，故选择超声时间为30 min；选择提取溶剂时分别考察了甲醇、50%甲醇、95%乙醇3种溶剂，结果甲醇作为提取溶剂时所得供试品溶液中岩白菜素含量最高，故选择提取溶剂为甲醇。
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（收稿日期：2012-07-11 本文编辑：郭静娟）