【摘要】 目的 为解决巴戟天配方颗粒在不具饮片外形后品种的真伪鉴别和质量优劣评价等重大技术问题。方法 采用薄层色谱法、紫外光谱线组法和红外光谱法分别对不同批次的巴戟天配方颗粒进行研究。结果 薄层色谱斑点清晰能与对照药材色谱对应;紫外光谱线组上的吸收峰数目及峰位值相同,重现性良好;红外光谱法操作简便,快捷,重现性良好。结论 研究的方法可有效地控制巴戟天配方颗粒的质量。
【关键词】 巴戟天配方颗粒;薄层色谱法;紫外光谱线组法;红外光谱法
Preliminary study on quality standards for Morinda particulate formulations
CHENG Xue-ren,LUO Wen-hui, SUN Dong-mei, et al.
Guangdong Provincial Institute of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510095,China
【Abstract】 Objective To solve the technical problems of authentication and quality standards inspection of Morinda particulate formulations.Methods Different baches of Morinda particulate formulations were researched by thin-layer chromatography(TLC), ultraviolet(UV) spectrum group-line method and fourier transform infrared spectroscopy(FTIR).Results Spots of TLC were clear in correspondence with those of the contol crude medicines. Absorption peak numbers and values in UV spectrum were same and its reproducibility was good. FTIR was simple, fast and had good reproducibility. Conclusion These methods used in this study can contol the quality of Morinda particulate formulations effectively.
【Key words】 Morinda particulata formulations; Thin-layer chromatography; Ultraviolet spectrum group-line; Fourier transform infrared spectroscopy
基金项目:国家“十五”重大科技专项“创新药物和中药现代化”课题(项目编号:2001BA701A38)
作者单位:510095广东省中医研究所
中药配方颗粒是以符合炮制规范的单味中药饮片为原料,采用现代制药工业的先进工艺和方法,经提取、浓缩、干燥、制粒制成一定规格供医疗机构临床配方使用的制成品,是中药饮片的一种补充形式,可供临床医生代替中药饮片使用。变传统中药汤剂的大包饮片用砂锅合煎、过滤饮服等繁杂操作为规范化工业大生产、小包装、水冲即服。既保持了原中药饮片的药性、药味和药效,又具有不需煎煮、疗效确切、安全方便等优点,是传统中药饮片与时俱进的产物,是“源于饮片,高于饮片”的现代中药汤剂。
巴戟天为常用药材,又名鸡肠风、鸡眼藤、三角藤等,味甘、辛,性微温。具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效,主治阳萎遗精、宫冷不孕、月经不调、风湿痹痛、筋骨痿软等症。《中国药典》2005年版一部收载巴戟天为茜草科植物巴戟天(Morinda officinalis How)的干燥根[2],主要分布于广东、广西、海南省区的热带和亚热带地区,广东省高要县和德庆县为该中药的道地产区,是我国著名的“四大南药”之一。
为了解决巴戟天配方颗粒在不具饮片外形后品种的真伪鉴别和质量优劣评价等重大技术问题,通过对巴戟天配方颗粒进行薄层色谱法、紫外光谱线组法[1]和红外光谱法鉴别研究,从而为巴戟天配方颗粒质量标准制定奠定基础。
1 仪器与试药
1.1 仪器 CAMAG Automatic TLC Sampler 4 全自动薄层自动点样仪(瑞士珈玛);CAMAG Reprostar 3 薄层成像系统(瑞士珈玛);硅胶G薄层层析玻璃板(德国默克);SHIMADZU UV-2501PC 型紫外分光光度计(日本岛津);Nicolet 6700傅立叶变换红外光谱仪(美国赛默飞世尔);Ez 0MNIC8.0软件;YP-2压片机(上海)。
1.2 试药 巴戟天配方颗粒(批号 0411019、0501072、0602035、0706032、0710084、0807044)由广东一方制药有限公司提供。对照品:巴戟天对照药材由中国药品生物制品检定所提供。试剂:光谱纯KBr粉末(英国BDH);水为蒸馏水;其余试剂均为分析纯。
2 薄层色谱鉴别
称取各批次巴戟天配方颗粒各2 g,加乙醇30 ml冷浸过夜,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。另取巴戟天对照药材4 g,加水100 ml,煮沸30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇30 ml,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版第一部附录VI B)试验,吸取上述溶液各10 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以二甲苯-甲酸乙酯-正己烷-甲醇-甲酸(20∶10∶8∶0.5∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点(如图1)。
3 紫外光谱线组鉴别
3.1 供试品溶液的制备
3.1.1 水提液 称取各批次巴戟天配方颗粒各1 g,分别置于50 ml容量瓶中,加水约45 ml,超声处理15 min,放冷,加水至刻度,摇匀,滤过,分别精密吸取续滤液1 ml于10 ml容量瓶中,稀释至刻度,摇匀,即得。
图1 巴戟天配方颗粒薄层鉴别图
1、批号04110192、批号05010723、批号0602035
4、批号07060325、批号07100846、批号0807044
7、巴戟天对照药材
3.1.2 石油醚提取液 称取各批次巴戟天配方颗粒各0.5 g,分别置于25 ml容量瓶中,加石油醚约20 ml,超声处理15 min,放冷,加石油醚至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
3.1.3 无水乙醇提取液 称取各批次巴戟天颗粒各0.25 g,分别置于25 ml容量瓶中,加无水乙醇约20 ml,超声处理15 min,放冷,加无水乙醇至刻度,摇匀,过滤,分别精密吸取续滤液5 ml于10 ml容量瓶中,稀释至刻度,摇匀,即得。
3.2 紫外光谱的测定 取上述各种溶液适量,置于1 cm 石英比色皿中,以各自的纯溶剂为空白对照,测定200～400 nm之间的紫外光谱图[1](见图2～10)。
图2 水提取液的紫外谱线图
图3 石油醚提取液的紫外谱线图
图4 无水乙醇提取液的紫外谱线图
图5 批号0411019的三种溶剂紫外谱线图
图6 批号0501072的三种溶剂紫外谱线图
图7 批号0602035的三种溶剂紫外谱线图
图8 批号0706032的三种溶剂紫外谱线图
图9 批号0710084的三种溶剂紫外谱线图
图10 批号0807044的三种溶剂紫外谱线图
3.3 结果
从上面紫外光谱图中可看出巴戟天配方颗粒的水提液、石油醚提取液和无水乙醇提取液的紫外光谱各不相同;其中水提液在(279±2)nm处有吸收峰;石油醚提取液在(270±2)nm、(218±1)nm处各有一吸收峰;无水乙醇提取液在(280±2)nm、(227±2)nm、269 nm处有吸收峰(见表1)。
表1
巴戟天配方颗粒的三种溶剂提取液紫外谱线组图峰位值最大吸收峰位值(nm)
λmax(H2O)λmax(EtOH)λmax(Pet)
279±2280±2270±2
227±2218±1
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3.4 重现性试验
按供试品制备方法,制备同一批供试品(批号:0411019)的三种溶剂提取液各5份,分别进行紫外光谱测定,测得谱线图。结果可知同批样品同一溶剂的紫外谱线图基本一致,说明重现性良好。
3.5 结论 根据巴戟天配方颗粒的水、石油醚、无水乙醇提取液的紫外谱线组图峰位值与峰型,可为巴戟天配方颗粒的鉴别提供依据。
4 红外光谱鉴别
4.1 供试品的制备 取本品1 mg～2 mg,加入约200 mg 在120 ℃干燥4 h的KBr粉末,在研钵中研磨、混匀,转移到模具中,在低真空下用9.81 GPa左右的压力,经1～2 min将样品压成透明的薄片[3]。压片的厚度约1～2 mm。
4.2 光谱测定 将上述样品置于傅立叶变换红外光谱仪(DTGS检测器,分辨率4 cm、扫描次数32次,扫描时实时扣除水和CO2的干扰)中,测定光谱范围在4000～400 cm之间的红外光谱图(结果如下)。
图11 巴戟天配方颗粒六批次的红外光谱图
图12 巴戟天配方颗粒红外特征光谱图
图13 巴戟天配方颗粒红外重现性光谱图
4.3 结果
从图中可看出各批号巴戟天配方颗粒的红外光谱基本相似,在408 cm、423 cm、517 cm、574 cm、704 cm、762 cm、776 cm、817 cm、862 cm、930 cm、1020 cm、1080 cm、1155 cm、1241 cm、1372 cm、1423 cm、1457 cm、1639 cm、2926 cm、3400 cm各处附近均有吸收峰。
在1080 cm、1423 cm附近均有多糖类的-OH峰,在1639 cm附近有-C=C-基团的吸收峰,2926 cm附近出现-CH2的吸收峰。共有峰及其具体峰位与整体峰形对于巴戟天配方颗粒的鉴别具有综合性特征意义。
4.4 重现性试验
按样品制备方法,对每一批号样品均压5个片,进行红外光谱测定。结果可知同一批号的各片样品所测得的红外谱图基本一致,说明重现性良好。
4.5 结论
根据巴戟天配方颗粒的红外光谱图的吸收峰位及峰型,可为巴戟天配方颗粒的鉴别提供依据。
5 小结与讨论
5.1 巴戟天配方颗粒的薄层色谱鉴别
对《中国药典》2005年版一部巴戟天项下鉴别方法进行了修改,样品与对照药材均用乙醇冷浸过夜,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液及对照药材溶液,以二甲苯-甲酸乙酯-正己烷-甲醇-甲酸(20︰10︰8︰0.5︰1)为展开剂,预饱和15 min,展开,取出,晾干后,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
5.2 巴戟天配方颗粒的紫外谱线组鉴别 为了提高紫外光谱鉴别的可靠性和灵敏性,在单一紫外光谱线法的基础上,根据巴戟天配方颗粒中化学成分的复杂性及各种化学成分的极性大小不同,并着眼于巴戟天配方颗粒中化学成分的整体效应,改单一溶剂为多种溶剂,改单一紫外光谱线为多条紫外光谱线组,以其紫外光谱线组的三条谱线上总的吸收峰数目及峰位值,可达到鉴别巴戟天配方颗粒的目的。
通过对六批次供试品的三种溶剂(水、石油醚、无水乙醇)紫外光谱线组图进行测定与分析,可知紫外光谱线组图法可鉴别巴戟天配方颗粒,在同一溶剂提取液中,吸收峰出现在相同的位置上。能全面地反映出巴戟天配方颗粒所含成分的整体效应差异性、特征性、灵敏性和方法的统一性。
5.3 巴戟天配方颗粒的红外光谱鉴别 《中国药典》采用红外光谱法鉴别药物的依据为:在规定的相同方法条件下,测得相同物质的红外光谱图一致。从上述所测红外光谱图可知,各批次供试品红外光谱图基本一致,说明是同一种配方颗粒。因此可利用不同批次供试品重复多次测定得到一个巴戟天配方颗粒的红外光谱标准,据此可用来鉴别巴戟天配方颗粒。
红外光谱法特有的宏观指纹特性与其技术操作简便快速,供试品处理简单,可用于中药配方颗粒的质量评价,继而实现快速在线质量控制,具有很重要的实践意义。
5.4 讨论 通过对此三种方法进行比较,可知三者各有优劣:薄层色谱法应用较广,对设备要求较低,但供试品的前处理操作比较复杂、耗费时间长;紫外光谱组线法谱图明确、简单,但利用多种溶剂提取,对环境有一定的污染;红外光谱法操作简单、快捷,耗时较短、所用试剂较少,但其谱图解析比较困难。综上所述,薄层色谱法、紫外谱线组法、红外光谱法均能用于鉴别巴戟天配方颗粒,这三种方法将成为鉴别配方颗粒的一种有效途径。